Изучение структурного разнообразия и биологической активности защитных пептидов из семян нигеллы посевной (Nigella sativa L.) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Барашкова Анна Сергеевна

• Барашкова Анна Сергеевна
• кандидат наук
• 2026

Оглавление диссертации кандидат наук Барашкова Анна Сергеевна

Введение

1. Обзор литературы

1.1. Общая характеристика антимикробных пептидов растений

1.2. Методы выделения и подходы к структурной характеристике АМП растений

1.3. Классификация АМП растений

1.4. Функции и типы активности АМП растений

1.5. Характеристика семейств АМП растений

1.5.1. АМП, с цистеин-стабилизированнм ав-мотивом

1.5.2. Cемейство тионинов

1.5.2.1. Биологическая активность тионинов

1.5.2.2. Механизм мембраноактивного действия тионинов

1.5.3. Дефензины

1.6. а-Спиральные АМП

1.6.1. Липид-переносящие белки

1.6.2. Харпиноподобные пептиды

1.6.3. Снакины

1.7. в-Структурные АМП, несущие цистиновый узел и смешанные

1.7.1. Ноттины

1.7.2. Циклотиды - циклические ноттины

1.8. Гевеино-подобные пептиды

1.9. Биологическая активность АМП растений. Подходы к применению

2. Объекты и методы

2.1. Реактивы и материалы

2.2. Растительный материал

2.3. Выделение, очистка и идентификация антимикробных пептидов

2.3.1. Получение белково-пептидоного экстракта из семян N. sativa

2.3.2. Обессоливание методом твердофазной экстракции высокого давления

2.3.3. Аффинная хроматография

2.3.4. Катионообменная хроматография

2.3.5. Обращённо-фазовая ВЭЖХ

2.3.6. Масс-спектрометрия методом LC/ESI-MS

2.3.7. Масс-спектрометрия методом MALDI-TOF/TOF MS

2.3.8. N-концевое секвенирование по Эдману

2.3.9. Восстановление и алкилирование

2.3.10. Определение чистоты пептида

2.3.11. Определение концентрации пептидов

2.3.12. 3D моделирование конструкции

2.4. Биологическая активность пептидов

2.4.1. Микроорганизмы

2.4.2. Природные изоляты грибов

2.4.3. Клинические изоляты грибов и дрожжей

2.4.4. Фитопатогенные грибы и оомицеты

2.4.5. Фитопатогенные бактерии

2.4.6. Линии клеток

2.4.7. Определение антифунгальной активности

2.4.8. Диско-диффузионный метод

2.4.9. Определение минимальной ингибирующей концентрации

2.4.10. Определение антифунгальной активность in vitro

2.4.11. Определение активности по отношению к оомицетам ex vivo

2.4.12. Определение антибактериальной активности

2.4.13. Определение цитотоксической активности

2.4.14. Влияние пептида нигеллотионина N. sativa на конденсацию гетерохроматина в клетках буккального эпителия

2.4.15. Влияние пептида на рост Aspergillus niger

2.4.16. Флюоресцентная микроскопия конидий A. niger после обработки пептидом

2.4.17. Действие пептида на искусственные мембраны

2.4.17.1. Конструирование синтетических двуслойных мембран и везикул

2.4.17.2. Измерение трансмембранных токов

2.4.17.3. Конфокальная флюоресцентная микроскопия

2.5. Получение рекомбинантного пептида

2.5.1. Конструкция экспрессионного вектора

2.5.1.1. Экспрессия гибридного белка, его выделение и очистка

2.5.2. Выделение и очистка гибридного белка

2.5.2.1. Твердофазная экстракция (ТФЭ) гибридного белка

2.5.2.2. Подтверждение чистоты белка Trx-NsW2

2.5.2.3. Аналитическая обращённо-фазовая ВЭЖХ

2.5.2.4. Электрофорез в денатурирующих условиях (ДСН-ПААГ)

2.5.2.5. Определение концентрации белка

2.5.3. Биологическая активность рекомбинантного гибридного белка Trx-NsW2

2.5.3.1. Определение антифунгальной активности рекомбинантного белка против фитопатогенного гриба Cochliobolus sativus

2.5.3.2. Влияния предпосевной обработки семян ячменя на устойчивость к возбудителю корневой гнили C. sativus

2.5.3.3. Росторегулирующая активность гибридного белка Trx-NsW2 по отношению к культурным растениям

3. Результаты

3.1. Оптимизация схемы выделения пептидов из семян Nigella sativa L

3.2. Выделение и структурная характеристика антимикробных пептидов нигеллы посевной

3.2.1. Новый дефензин NsD4: выделение и идентификация структуры

3.2.2. Выделение и идентификация новых липид-переносящих белков NsLTP2 и NsLTP3

3.2.3. Пептиды N. sativa, принадлежащие к семейству тионинов

3.3. Антимикробная активность пептидов семян N. sativa

3.3.1. Определение антифунгальной активности NsLTP3

3.3.2. Активность NsLTP3 против оомицета Phytophthora infestans

3.3.3. Антибактериальная активность NsLTP3

3.3.4. Антифунгальная активность нигеллотионинов против мицелиальных грибов рода Aspergillus

3.3.5. Активность природного нигеллотионина NsW2

3.3.6. Определение минимальной ингибирующей концентрации для NsW2 по отношению к грибам рода Aspergillus

3.3.7. Характеристика роста коллекционного штамма A. niger в присутствии нигеллотионина NsW2

3.3.8. Действие нигеллотионина NsW2 на конидии гриба A. niger в процессе прорастания

3.3.9. Цитотоксическая активность нигеллотионина NsW2 семян N. sativa в отношении опухолевых и нормальных клеточных линий in vitro

3.3.10. Действие нигеллотионина NsW2 на искусственные мембраны и гигантские однослойные везикулы

3.4. Получение рекомбинантного гибридного белка, содержащего нигеллотионин NsW2

3.4.1. Определение антифунгальной активности гибридного белка Trx-NsW2

3.4.2. Определение цитотоксической активности рекомбинантного гибридного белка Trx-NsW2

3.4.3. Активность гибридного белка Trx-NsW2 на растения в микровегетационных экспериментах

3.4.4. Эффективность Trx-NsW2 для борьбы с грибными болезнями растений

4. Обсуждение результатов

4.1. Схема выделения АМП из семян нигеллы

4.2. Структура пептидов нигеллы посевной

4.2.1. Новые дефензины N. sativa

4.2.2. Новые нсЛПБ из N. sativa

4.2.3. Новые тионины из N. sativa

4.3. Биологическая активность новых пептидов, выделенных сеян из N. sativa

4.3.1. Активность нсЛПБ семян нигеллы

4.3.2. Активность тионинов семян нигеллы

4.3.2.1. Активность тионина NsW2

4.3.2.2. Механизм антифунгального действия пептида NsW2 на клеточном уровне

4.3.2.3. Взаимодействие нигеллотионина NsW2 с искусственными мембранами

4.4. Действие гибридного белка TrxNsW2 на рост растений в микровегетационных экспериментах

5. Выводы

Список литературы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение структурного разнообразия и биологической активности защитных пептидов из семян нигеллы посевной (Nigella sativa L.)»

Введение Актуальность исследования

Антимикробные пептиды (АМП) представляют собой группу метаболитов, объединённую по одному признаку: способности конкретной молекулы подавлять рост микроорганизмов - бактерий, грибов, оомицетов, дрожжей, иногда к ним же причисляют простейших [1]. В самом широком смысле, к этой группе относятся как ген-кодируемые пептиды, так и продукты нерибосомального синтеза - пептидные антибиотки бактерий и грибов. В фокусе настоящей работы находятся именно рибосомальные пептиды. Резервуарами АМП могут служить разнообразные организмы, от прокариот до млекопитающих. Так бактерии - представители родов Bacillus, Entherococcus, Lactobacillus являются продуцентами пептидов бактериоцинов [2], а у позвоночных описано разнообразие защитных пептидов среди которых два - кателицидины и дефензины являются наиболее обширными [3].

Отдельное место среди АМП занимают защитные пептиды растений. Небольшие молекулы массой до 12 кДа, в большинстве своём обогащённые аминокислотными остатками цистеина. С точки зрения структуры они разделены на восемь структурных семейств на основании общности цистеиновых мотивов, образуемых дисульфидными связями, которые способствуют формированию пространственной конформации и обеспечивают их структурно-функциональную стабильность (Tam et al., 2015). Помимо основных семейств существует разнообразие молекул, не входящих в общую классификацию, и даже не имеющих в структуре характерных для группы в целом остатков цистеина, но при этом проявляющих антимикробную активность. С точки зрения свойств данных молекул, для абсолютного большинства показана выраженная способность подавлять рост микроорганизмов in vitro. При этом, речь идёт не только о фитопатогенных организмах, но также о бактериях и грибах, имеющих клиническую значимость. Эти свойства служат причиной того, что АМП растений, наряду с антибиотиками и АМП из других источников многими авторами рассматриваются как прототипы антимикробных препаратов для медицинских нужд [4]. Механизм антимикробного действия многих АМП связан с взаимодействием с клеточными мембранами, эта характеристика определяет наличие цитотоксических свойств у многих АМП. Данный аспект также привлекает внимание с точки зрения разработки противоопухолевых препаратов.

С точки зрения функций, известно, что защитные пептиды растений являются компонентом конститутивного иммунитета растений, они представляют первую линию

обороны при вторжении патогена в пространство апопласта. То есть, свою прямую антимикробную активность они реализуют в момент, когда фитопатогенный организм преодолевает физические барьеры растения. Пути её реализации также разнятся. Так, для растительных дефензинов на примере NaD1 табака (Nicotiana alata) показано, что при проникновении в клетку патогена он способен нарушать кальциевый сигналинг, активировать продукцию активных форм кислорода и запускать каскады, связанные с программируемой клеточной смертью [5,6]. Для пептидов семейства неспецифических липид-переносящих белков (нсЛПБ) характерна сигнальная роль, когда, находясь в комплексе со стеринами или жасмоновой кислотой, они связываются с лейцин-богатыми повторами трансмембранных доменов и запускают киназный каскад, влияя таким образом на экспрессию защитных генов. Гевеино-подобный пептид пшеницы WAMP способен обезвреживать фунгализин - фермент гриба Fusarium sp., ингибирующий растительные хитиназы [7]. И, наконец, прямое литическое действие, которое описано для пептидов разных семейств (тионинов, дефензинов, циклотидов, нсЛПБ и др.) in vitro, также может быть реализовано в процессе патогенеза, как защитный механизм [8]. Нельзя обойти вниманием работу защитных пептидов в системе симбионт-хозяин. За счёт одновременной модификации клеточных мембран симбиотических бактерий и растения происходит формирование симбиосомы.

Три семейства защитных пептидов растений относятся к группе белков, связанных с патогенезом (Pathogenesis related proteins, PR-белки). Это тионины (PR-12), и уже упомянутые дефензины (PR-13) и нсЛПБ (PR-14) [9]. Критерием, позволяющим отнести их к данной группе защитных молекул, является усиление экспрессии соответствующих генов в ответ на действие патогенных организмов. Известны примеры создания трансгенных линий сельскохозяйственных культур, характеризующихся повышенной экспрессией генов защитных пептидов. Для них была показана повышенная устойчивость к действию патогенных организмов, а также к абиотическим стрессам [1012]. Этот факт указывает на то, что действие защитных пептидов шире, чем инактивация патогенов, и даже шире, чем работа в системе растительно-микробных взаимодействий при симбиозе. Таким образом, исследование защитных пептидов растений приобретает дополнительную актуальность в связи с разработкой новых средств защиты растений. Фундаментом для разработки подобных препаратов служит глубинное понимание работы систем, составляющих иммунитет растений. Вклад защитных пептидов в общий иммунитет растения с трудом поддаётся оценке. Известно, что их функции простираются за пределы антимикробной активности, связанной с подавлением патогенных организмов, а включает в себя защиту от действия абиотических факторов

среды. Являясь компонентом конститутивного иммунитета, защитные пептиды присутствуют и работают в организме растения как комплекс. Между тем, разнообразие пептидов на уровне вещества в пригодных для экстракции количествах в тканях одного растения описано для сравнительно небольшого разнообразия растений, равно как и разнообразие пептидов, принадлежащих к одному семейству.

В данной работе рассмотрен комплекс защитных пептидов, присутствующий в семенах нигеллы посевной (Nigella sativa). Само растение имеет более чем трёхтысячелетнюю историю фармакологического применения в традиционной медицине стран Ближнего Востока. Хорошо изучен комплекс активных низкомолекулярных соединений жирного масла нигеллы, среди которых преобладает монотерпен тимохинон, присутствием которого объясняются множественные фармакологические эффекты (Huang et al., 2025; Ravi et al., 2025). Также, семена нигеллы посевной используют как пряность в кулинарии. Нигеллу посевную выращивают в культуре. Так, в России в НИИ Сельского хозяйства республики Крым возделывают сорт «Крымчанка» местной селекции, на семенах которого выполнена представляемая работа (Государственный реестр селекционных достижений, допущенных к использованию Т.1. "Сорта растений" (официальное издание), 2020).

Настоящая работа является продолжением исследований, начатых в 2009 г, когда Ощепковой Ю. И. с соавторами впервые были опубликованы данные о пептиде из семян нигеллы посевной, принадлежащем к структурному семейству неспецифических ЛПБ, способном подавлять рост грибов и оомицетов (Ощепкова et al., 2009). В ходе дальнейших исследований были выделены и охарактеризованы два пептида семейства растительных дефензинов и один дефензин был предсказан (Rogozhin et al., 2011; Beliaev et al., 2020). Также были выделены и частично охарактеризованы два тионина (Vasilchenko et al., 2017). В ходе настоящей работы удалось существенно расширить имеющийся набор сведений о разнообразии защитных пептидов семян нигеллы посевной, дополнить разнообразие дефензинов и нсЛПБ. В ходе работы было обнаружено, что в семенах нигеллы посевной (N. sativa) содержится исключительно богатое разнообразие пептидов семейства тионинов. Выделение сопоставимого по количеству разнообразия молекул из одного, относящихся к одному семейству, ранее удавалось только для циклических пептидов фиалок (Violaceae) (Goransson et al., 1999). Присутствие в экстракте пептидов, относящихся к мультигенному семейству тионинов, позволяет сделать вывод, что гены, кодирующие эти пептиды, экспрессируются в семенах N. sativa.

Один из тионинов - нигеллотионин NsW2 - был изучен подробно с точки зрения

активности и механизма её реализации. Так, для него была определена активность против клинических изолятов дрожжей и мицелиальных грибов и цитотоксическая активность по отношению к клеткам нормальной и опухолевых линий, для него был также предположен механизм действия на молекулярном уровне.

Антимикробные пептиды в целом и защитные пептиды растений в частости на протяжении истории исследования рассматривались некоторыми авторами, как потенциальные препараты для использования в медицине и ветеринарии. Однако, на данный момент более перспективным представляется применение их в качестве препаратов для сельского хозяйства (пестициды, компоненты комплексных препаратов) для борьбы с фитопатогенами и вредителями. В данной работе было проведено исследование потенциальной возможности использования рекомбинантного гибридного белка с пептидом-тионином в качестве прототипа препарата для сельского хозяйства.

Цель работы и поставленные задачи

Цель данной работы заключалась в выделении, оценке структурного разнообразия и исследовании спектра биологической активности защитных пептидов семян нигеллы посевной (Nigella sativa L.)

В рамках поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Оптимизировать способ выделения комплекса защитных пептидов из семян N. sativa;

2. Провести оценку структурного разнообразия защитных пептидов семян N. sativa;

3. Изучить биологическую активность защитных пептидов семян N. sativa;

4. Исследовать действие одного из выделенных пептидов на клеточном и молекулярном уровнях;

5. Оценить биологическую эффективность защитного пептида семян N. sativa в составе гибридного белка в условиях лабораторных и микровегетационных экспериментов.

Научная новизна и практическая значимость работы

В ходе работы впервые был охарактеризован комплекс защитных пептидов, находящихся в семенах одного растения. Впервые в одном растении был подтверждён биосинтез тионинов - пептидов, принадлежащих к мультигенному семейству. Получены экспериментальные подтверждения механизма действия тионинов на биологические мембраны, аналогичные по составу природным. Детально изучено влияние одного из активных пептидов на ростовые процессы микроскопического гриба Aspergillus niger, что принципиально для разработки подходов к его дальнейшему применению. Были получены

сведения об активности гибридного белка, состоящего из тиоредоксина и тионина, против мицелиального гриба A. niger, выраженное в нарушении накопления пигмента меланина в вегетативных репродуктивных структурах (конидиях). Также гибридный белок был протестирован в микровегетационных экспериментах на сельскохозяйственных культурах в условиях искусственного заражения. И хотя белок на данный момент не может быть применён в качестве препарата для защиты растений, ввиду его слабовыраженной активности в условиях эксперимента, полученные данные указывают на его потенциал в качестве регулятора роста и иммунного ответа растений.

Положения, выносимые на защиту

1. Оптимизированная схема выделения защитных пептидов из семян растений существенно упрощает процесс фракционирования экстракта;

2. Семена Nigella sativa представляют собой богатый источник защитных пептидов, разнообразных по структуре и спектру биологической активности.

3. Выделенные пептиды демонстрируют антимикробную активность in vitro по отношению к широкому спектру условно-патогенных и фитопатогенных грибов и бактерий.

4. Защитный пептид семян N. sativa из семейства тионинов обладает выраженной цитотоксической активностью in vitro, механизм действия которой не имеет концентрационно-зависимого характера.

5. Защитный пептид семян N. sativa из семейства тионинов в составе рекомбинантного гибридного белка с тиоредоксином Escherichia coli подавляет образование пигмента у мицелиального гриба Aspergillus niger, а также обладает ростостимулирующим и иммуномодулирующим действием на культурные растения.

Личное участие соискателя в получении результатов, изложенных в диссертации Личный вклад соискателя Барашковой А.С. состоит в выделении всех заявленных в данной работе пептидов из биологического материала, их очистке, химической модификации молекул, участии в определении частичных и полных аминокислотных последовательностей, препаративной наработке одного из природных пептидов и его получения в составе рекомбинантного гибридного белка, тестировании антифунгальной активности в лабораторных условиях, исследовании способа действия одного из пептидов на мицелиальный гриб методами фотометрии и флуоресцентной микроскопии. Автор принимал непосредственное участие в анализе полученных результатов экспериментов и подготовке всех публикаций по теме диссертации. Результаты экспериментов по определению антипролиферативной активности получены сотрудниками ФГБНУ "Научно-

исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков имени Г.Ф. Гаузе" и ФГБНУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова»; эксперименты по взаимодействию пептида семян нигеллы (N. sativa) с искусственными мембранами проводились на базе ФГБНУ «Институт цитологии Российской академии наук»; оценка биологической эффективности тионина семян нигеллы (N. sativa) в составе гибридного белка в условиях микровегетационых экспериментов осуществлена в ФГБНУ "Агрофизический научно-исследовательский институт".

Апробация работы

По теме диссертационной работы опубликовано 5 статей статей в рецензируемых журналах, входящих в базы данных Scopus и Web of Science и 2 - в журналах, индексируемых в RSCI (ядро РИНЦ). Результаты работы были представлены в виде стендовых, секционных и пленарного докладов на 8 всероссийских и международных конференциях.

1. Barashkova, A.S.; Rogozhin, E.A. Isolation of antimicrobial peptides from different plant sources: Does a general extraction method exist? // Plant Methods 2020, 16, 1-10

2. Barashkova, A.S.; Sadykova, V.S.; Salo, V.A.; Zavriev, S.K.; Rogozhin, E.A. Nigellothionins from Black Cumin (Nigella sativa L.) Seeds Demonstrate Strong Antifungal and Cytotoxic Activity. // Antibiotics 2021, 10, 166

3. Barashkova, A.S.; Smirnov, A.N.; Zorina, E.S.; Rogozhin, E.A. Diversity of Cationic Antimicrobial Peptides in Black Cumin (Nigella sativa L.) Seeds. // Int. J. Mol. Sci. 2023, 24, 8066

4. Barashkova, A.S.; Ryazantsev, D.Y.; Zhuravleva, A.S.; Sharoyko, V.V.; Rogozhin, E.A. Recombinant Fusion Protein Containing Plant Nigellothionin Regulates the Growth of Food-Spoiling Fungus (Aspergillus niger). // Foods 2023, 12, 3002.

5. Барашкова А.С., Рогожин Е.А. Потенциал антимикробных пептидов растений для защиты сельскохозяйственных культур от возбудителей болезней. // Вестник защиты растений, 2023, 106(3), с. 120-136

6. Панова, Г.Г.; Семенов, К.Н.; Артемьева, А.М.; Рогожин, Е.А.; Барашкова, А.С.; Корнюхин, Д.Л.; Хомяков, Ю.В.; Балашов, Е.В.; Галушко, А.С.; Вертебный, В.Е.; et al. Влияние нанокомпозиций на основе производных легких фуллеренов на культурные растения в благоприятных и стрессовых условиях среды их обитания. // Журнал технической физики 2022, 92, 1045.

7. Журавлева А. С., Волкова Е. Н., Ямалова Н. Р., Барашкова А. С., Рогожин Е. А., Юрьев Г. О., Вертебный В. Е., Дубовицкая В. И., Хомяков Ю. В., Удалова О. Р., Семенов К. Н., Панова Г. Г Влияние нанокомпозиций на основе лёгких фуллеренов на состояние и продуктивность карликовых форм томата. // Агрофизика № 4, с. 16-29.

Тезисы международных и всероссийских конференций:

1. Барашкова А.С., Рогожин Е.А. Универсальный метод выделения антимикробных пептидов из растений как основа для разработки биопестицидов «нового поколения» // Тезисы докладов IV Всероссийского конгресса по защите растений «Фитосанитарные технологии в обеспечении независимости и конкурентноспособности АПК России», приуроченного к 90-летнему юбилею создания ВИЗР, г. Санкт-Петербург, 9-11 сентября 2019 года, С. 255.

2. Е.А. Рогожин, А.С. Барашкова, Л.Г. Деженкова, В.С. Садыкова. Антимикробные пептиды из семейства тионинов, выделенные из семян черного тмина (Nigella sativa L), обладают цитотоксичностью по отношению к линиям опухолевых клеток in vitro // Материалы V Всероссийской конференции по молекулярной онкологии, Москва, 16-18 декабря 2019 года, Успехи молекулярной онкологии, 2019, Т. 6 (№4 Приложение), С. 158159.

3. Барашкова А.С., Рогожин Е.А. Бифункциональные полипептиды семян чернушки посевной (Nigella sativa L.) семейства тионинов как перспективные антифунгальные и противоопухолевые агенты // Сборник тезисов XXXII Зимней молодежной научной школы «Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии», Москва, ИБХ РАН, 10-13 февраля 2020 года, С. 40.

4. A. S. Barashkova, D. Y. Ryazantsev, V. S. Sadykova, S. K. Zavriev, E. A. Rogozhin. Thionins from blackseed (Nigella sativa L.) with multiple activity // Abstracts of the 45th FEBS Congress, Molecules of Life: Toward New Horizons, Ljubljana, Slovenia, July 3-8, 2021, FEBS Open Bio, V. 11 (Suppl. 1), 2021, P. 384. doi: 10.1002/2211-5463.13205.

5. Барашкова А.С., Рогожин Е.А. Разнообразие катионных пептидов нигеллы посевной как источник средств защиты растений нового поколения // Тезисы докладов V Всероссийского конгресса по защите растений, г. Санкт-Петербург, 16-19 апреля 2024 года, С. 322.

6. Barashkova A., RogozhinE. The potency of plant antimicrobial peptide nigellothionin NsW2 in a complex with Escherichia coli thioredoxin as a regulator of plant and fungal growth // Abstracts of the 8th International Conference on Chemistry, Structure and function of biomolecules, The Republic of Belarus, Minsk, October 1-5, 2024, P. 61.

7. Барашкова А. С., Рогожин Е. А. Комплекс антимикробного пептида нигеллотионина из семян нигеллы посевной (Nigella sativa L.) с тиоредоксином Escherichia coli, как регулятор роста грибов и растений // Материалы мемориальной микологической конференции, г. Москва, 13-14 мая 2025 года, Современная микология в России. - Т. 11, С. 280.

8. Барашкова А.С., Остроумова О.С., Ефимова С.С., Рогожин Е.А. Подходы к изучению молекулярного механизма антифунгального действия защитного пептида структурной группы тионинов из семян нигеллы посевной (Nigella sativa L.) // Материалы XX Международной научной конференции "Актуальные вопросы биологической физики и химии БФФХ - 2025", Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, г. Москва, 9-12 октября 2025 г., С. 82-83.

1. Обзор литературы

1.1. Общая характеристика антимикробных пептидов растений

Антимикробные пептиды растений (АМП) обладают рядом общих структурно-функциональных характеристик, которые позволяют выделить их в отдельную группу метаболитов. С точки зрения структуры, большинство из них - это небольшие (до 12 кДа) молекулы, несущие положительный поверхностный заряд, обогащённые остатками цистеина. Дисульфидные связи (от 2 в харпино-подобных пептидах до 12 в снакинах) обеспечивают стабильность пространственной укладки, компактность структуры и устойчивость к химическим агентам и физическим факторам среды. Функции, выполняемые АМП в растительном организме, - разнообразны. АМП представляют собой первую линию обороны при взаимодействии с патогенными организмами, вредителями и неблагоприятными факторами среды. Помимо прямого ответа при вторжении патогенного организма, направленного на его уничтожение, или инактивацию факторов вирулентности, АМП, как сигнальные молекулы участвуют в формировании защитных структур растения. Они осуществляют посредническую функцию при формировании системной приобретённой устойчивости. Кроме того, они задействованы в симбиотических отношениях с ризобиями.

В настоящий момент накоплен большой объём знаний о разнообразии функций и типах активности АМП. Но впервые эта группа метаболитов обратила на себя внимание именно благодаря антимикробным, а точнее, антифунгальным свойствам [13]. Первые упоминания о «токсической субстанции, содержащейся в пшеничной муке, губительной для пивных дрожжей» относятся к первой половине XX века [14]. Но только в 70-х годах, с развитием техник работы с белками, удалось определить истинную природу этого вещества. Это оказалась смесь пептидных молекул массой до 5 кДа, богатых серой, за что они получили название «тионины» (от греческого бехш - сера). Они продемонстрировали высокий уровень антимикробной активности по отношению к микроскопическим грибам и бактериям [15].

1.2. Методы выделения и подходы к структурной характеристике АМП растений

Первым антимикробным пептидом, выделенным из растительного материала в кристаллическом виде, стал крамбин из семян крамбе (катран) Crambe abyssinica [16]. Для выделения пептида применили экстракцию обезжиренных семян 80% водным ацетоном. Это один из сравнительно немногих примеров выделения растительных АМП с

применением органических экстрагентов. В подавляющем большинстве случаев, экстракция проводится с использованием водных растворов солей и кислот.

Основными этапами выделения АМП из растений являются: гомогенизация растительного материала, экстракция с использованием выбранного экстрагента, концентрирование, очистка и подготовка к дальнейшему разделению.

На этапе гомогенизации части растения подвергаются механическому разрушению. Иногда перед гомогенизацией растительный материал подвергают дополнительной обработке, если это необходимо. Вегетативные части растений высушивают, как было сделано при выделении циклических АМП из гибантуса (Hybanthus parviflorus) или замораживают в жидком азоте, как при выделении дефензинов из табака (Nicotiana alata) и сосны обыкновенной (Pinus sylvestris), а также пептидов из семян тополя (Populus trichocarpa) и лапчатки (Potentilla anserina) [5,17-20]. Сочные плоды очищают от семян, как делали при выделении пептидов из плодов перца (Capsicum annuum), семена высушивают, если позволяет размер, очищают от оболочек, и лиофилизуют [16,21-23]. Способ измельчения выбирают исходя из физических свойств растительного материала. Семена, а также высушенные части растений перемалывают в кофемолке. Замороженные части растений растирают с жидким азотом при помощи ступки и пестика. Сочные плоды перемалывают в блендере в присутствии экстракционного буфера. В первых работах, посвященных выделению АМП из растений, были применены общие подходы к выделению белков. В качестве экстракционных буферов применяли водные растворы солей, буферные растворы или разбавленные кислоты [24,25].

В отдельных случаях применялся подход, разработанный и апробированный ранее для экстракции пептидов позвоночных. Так, Ч. Дж. Парк с соавторами [26] в работах по исследованию шефферинов - пептидов пастушьей сумки (Capsella bursa-pastoris), обогащенных аминокислотными остатками глицина и гистидина, использовали методику выделения, применявшуюся ими ранее при выделении пептидов из тканей желудка дальневосточной жабы (Bufo bufo gargarizans). Позднее, этот метод был неоднократно применён другими исследовательскими группами для выделения АМП из растений [27-31].

В настоящее время, для выделения АМП используют две группы экстрагентов: воду и водные растворы солей и кислот; и органические растворители, включая водный этанол. При этом, первые применяют значительно чаще, чем вторые.

Так как большинство АМП растений обладает катионными свойствами, их выделение при помощи растворов кислот или буферных растворов со значениями рН в кислотной области, представляется наиболее эффективным [32,33]. При экстракции водными растворами кислот, в первую очередь экстрагируются белки и пептиды, имеющие

положительный поверхностный заряд. Именно таким образом были выделены первые тионины из зёрен пшеницы (Triticum aestivum) и ячменя (H. vulgare). Для экстракции пуротионинов из эндосперма ячменя (Hordeum vulgare) - один из первых случаев выделения АМП - был использован 0,05 н раствор серной кислоты [15]. Тогда же была предложена первая схема выделения и очистки АМП, предполагавшая серию переосаждений: этанолом до концентрации 50%, трихлоруксусной кислотой (ТХУ) до концентрации 0,1 М, осаждение пиридином до 80% эфирного экстракта после очистки от ТХУ, NaOH до рН 10, и, наконец, перерастворение супернатанта в серной кислоте до рН 7. Она применялась позднее с некоторыми модификациями для выделения дефензинов [34]. Для кислотной экстракции применяют 50 мМ H2SO4 [5,15,18,35,36], 2 и 10% СН3СООН [37]. Также применяется 0,1M HCl [38] в присутствии 150 мМ NaCl, как и в случае экстракции буферными растворами, повышение ионной силы раствора позволяет произвести первичную очистку от высокомолекулярных запасных белков за счёт их перехода в нерастворимую форму, что особенно актуально при работе с богатыми белком семенами.

При использовании в качестве экстрагентов солевых буферов, воды или растворов кислот, в раствор выходит смесь белков и пептидов. Для сбора белково-пептидоной фракции, её концентрируют, и чаще всего для этого используют метод высаливания -насыщение раствора сульфатом аммониям [18-22,36,39-45]. Для удаления сульфата аммония после высаливания полученный осадок подвергают диализу против воды или экстракционного буфера. Альтернативой высаливанию служат концентрирование в присутствии ТХУ или охлаждённого органического растворителя - изопропанола или ацетона.

Для удаления солей используется диализ против воды или буферного раствора, использовавшегося при экстракции. Вместо диализа часто применяют так называемое обессоливание (хроматографию низкого давления) на гидрофобных сорбентах (фенил-сефароза, сорбент для обращённо-фазовой хроматографии С8, С18), а также твердофазную экстракцию (ТФЭ) [26,31,46]. Полученный белково-пептидный экстракт наносится на хроматографическую колонку или картридж для ТФЭ, белки и пептиды связываются с фазой, за счёт гидрофобных взаимодействий. Для элюции целевых веществ, используют буферный раствор с добавлением органического растворителя - метанола или ацетонитрила. Для обессоливания может также быть применён метод гель-фильтрации.

Органические растворители или их водные растворы применяются значительно реже в сравнении с водными экстрагентами. Наиболее тщательно проработана методика выделения циклических пептидов семейства циклотидов, есть примеры выделения

тионинов (вискотоксины, крамбин), метод также применяется при поиске новых пептидов [47-50]

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Барашкова Анна Сергеевна, 2026 год

Список литературы

1. Oliveira Júnior N. G. и др. Antimicrobial peptides: structure, functions and translational applications // Nature Reviews Microbiology. Nature Research, 2025.

2. Soltani S. и др. Bacteriocins as a new generation of antimicrobials: toxicity aspects and regulations // FEMS Microbiology Reviews. 2021. Т. 45, № 1. С. fuaa039.

3. Avila E. E. Functions of Antimicrobial Peptides in Vertebrates // Curr Protein Pept Sci. 2017. Т. 18, № 11. С. 1098-1119.

4. Camarero J. A., Campbell M. J. The Potential of the Cyclotide Scaffold for Drug Development // Biomedicines. Biomedicines, 2019. Т. 7, № 2.

5. Van Der Weerden N. L., Lay F. T., Anderson M. A. The plant defensin, NaD1, enters the cytoplasm of Fusarium oxysporum hyphae // Journal of Biological Chemistry. A© 2008 ASBMB. Currently published by Elsevier Inc; originally published by American Society for Biochemistry and Molecular Biology., 2008. Т. 283, № 21. С. 14445-14452.

6. Hayes B. M. E. и др. The plant defensin NaD1 enters the cytoplasm of Candida albicans via endocytosis // Journal of Fungi. 2018. Т. 4, № 1. С. 1-15.

7. Slavokhotova A. A. и др. Novel mode of action of plant defense peptides - hevein-like antimicrobial peptides from wheat inhibit fungal metalloproteases // FEBS Journal. 2014. Т. 281, № 20. С. 4754-4764.

8. Romero A., Alamillo J. M., García-Olmedo F. Processing of thionin precursors in barley leaves by a vacuolar proteinase // European Journal of Biochemistry. 1997. Т. 243, № 1-2. С. 202-208.

9. Финкина Е. И. и др. Пептиды системы врожденного иммунитета растений. Часть I. Структура, биологическая активность и механизмы действия // Биоорганическая химия. Pleiades Publishing Ltd, 2019. Т. 45, № 1. С. 3-16.

10. Ali S. и др. Pathogenesis-related proteins and peptides as promising tools for engineering plants with multiple stress tolerance // Microbiological Research. Elsevier GmbH, 2018. Т. 212-213. С. 29-37.

11. De Souza Candido E. и др. The use of versatile plant antimicrobial peptides in agribusiness and human health // Peptides. Elsevier, 2014. Т. 55. С. 65-78.

12. Guo L. и др. Lipid transfer protein 3 as a target of MYB96 mediates freezing and drought stress in Arabidopsis // Journal of Experimental Botany. Oxford Academic, 2013. Т. 64, № 6. С.1755-1767.

13. De Souza Candido E. и др. The use of versatile plant antimicrobial peptides in agribusiness and human health // Peptides. Elsevier, 2014. Т. 55. С. 65-78.

14. Allen P. W. Industrial Fermentations. New York: Book department The Chemical Catalog Company, Inc, 1926. C. 4231 c.

15. Okada T., Yoshizumi H., Terashima Y. A Lethal Toxic Substance for Brewing Yeast in Wheat and Barley: Part I. Assay of Toxicity on Various Grains, and Sensitivity Of Various Yeast Strains // Agricultural and Biological Chemistry. 1970. T. 34, № 7. C. 1084-1088.

16. Van Etten C. H., Nielsen H. C., Peters J. E. A crystalline polypeptide from the seed of Crambe abyssinica // Phytochemistry. Pergamon, 1965. T. 4, № 3. C. 467-473.

17. Broussalis A. M. u gp. First cyclotide from Hybanthus (Violaceae) // Phytochemistry. 2001. T. 58, № 1. C. 47-51.

18. Kovaleva V. u gp. Purification and molecular cloning of antimicrobial peptides from Scots pine seedlings // Peptides. 2009. T. 30, № 12. C. 2136-2143.

19. Al Akeel R. u gp. Alanine rich peptide from Populus trichocarpa inhibit growth of Staphylococcus aureus via targetting its extracellular domain of Sensor Histidine Kinase YycGex protein // Microbial Pathogenesis. Elsevier Ltd, 2018. T. 121, № April. C. 115-122.

20. Shen Y. u gp. Potentides: New Cysteine-Rich Peptides with Unusual Disulfide Connectivity from Potentilla anserina // ChemBioChem. Wiley-VCH Verlag, 2019. T. 20, № 15. C. 19952004.

21. Osborn R. W. u gp. Isolation and characterisation of plant defensins from seeds of Asteraceae, Fabaceae, Hippocastanaceae and Saxifragaceae // FEBS Letters. 1995. T. 368, № 2. C. 257262.

22. Taveira G. B. u gp. Thionin-like peptides from Capsicum annuum fruits with high activity against human pathogenic bacteria and yeasts // Biopolymers - Peptide Science Section. 2014. T. 102, № 1. C. 30-39.

23. Wong K. H. u gp. Vaccatides: Antifungal glutamine-rich hevein-like peptides from Vaccaria hispanica // Frontiers in Plant Science. 2017. T. 8:1100, № June.

24. Barber D. u gp. Isolation and characterization of thirteen new salt-soluble proteins from barley by reversed-phase high-performance liquid chromatography // Planta. 1988. T. 176, № 2. C. 221-229.

25. Limas G. G. u gp. Purification and characterization of ten new rice NaCl-soluble proteins: identification of four protein-synthesis inhibitors and two immunoglobulin-binding proteins // Planta. 1990. T. 181, № 1. C. 1-9.

26. Park C. J. C. B. u gp. Characterization and cDNA cloning of two glycine- and histidine-rich antimicrobial peptides from the roots of shepherd's purse, Capsella bursa-pastoris // Plant Molecular Biology. Springer, 2000. T. 44, № 2. C. 187-197.

27. Egorov T. A. h gp. Diversity of wheat anti-microbial peptides // Peptides. 2005. T. 26, № 11. C. 2064-2073.

28. Odintsova T. I. h gp. Seed defensins from T. kiharae and related species: Genome localization of defensin-encoding genes // Biochimie. 2007. T. 89, № 5. C. 605-612.

29. Odintsova T. I. h gp. Seed defensins of barnyard grass Echinochloa crusgalli (L.) Beauv. // Biochimie. Elsevier Masson SAS, 2008. T. 90, № 11-12. C. 1667-1673.

30. Odintsova T. I. h gp. Analysis of Triticum boeoticum and Triticum urartu seed defensins: To the problem of the origin of polyploid wheat genomes // Biochimie. Biochimie, 2008. T. 90, № 6. C. 939-946.

31. Dias G. B. h gp. Isolation, characterization and antifungal activity of proteinase inhibitors from Capsicum chinense Jacq. seeds // Protein Journal. 2013. T. 32, № 1. C. 15-26.

32. Campos M. L. h gp. The role of antimicrobial peptides in plant immunity // Journal of Experimental Botany. 2018. T. 69, № 21. C. 4997-5011.

33. Finkina E. I. h gp. Peptides of the Innate Immune System of Plants. Part I. Structure, Biological Activity, and Mechanisms of Action // Russian Journal of Bioorganic Chemistry. Pleiades Publishing, 2018. T. 44, № 6. C. 573-585.

34. Lay F. T., Brugliera F., Anderson M. A. Isolation and properties of floral defensins from ornamental tobacco and petunia // Plant Physiology. 2003. T. 131, № 3. C. 1283-1293.

35. Terras F. R. G. h gp. In Vitro Antifungal Activity of a Radish (Raphanus sativus L.) Seed Protein Homologous to Nonspecific Lipid Transfer Proteins // Plant Physiology. Oxford Academic, 1992. T. 100, № 2. C. 1055-1058.

36. Lay F. T., Brugliera F., Anderson M. A. Isolation and properties of floral defensins from ornamental tobacco and petunia // Plant Physiology. 2003. T. 131, № 3. C. 1283-1293.

37. Rogozhin E. A. h gp. Novel antifungal defensins from Nigella sativa L. seeds // Plant Physiology and Biochemistry. Elsevier Masson, 2011. T. 49, № 2. C. 131-137.

38. Franco O. L. h gp. Identification of a cowpea y-thionin with bactericidal activity // FEBS Journal. 2006. T. 273, № 15. C. 3489-3497.

39. Harrison S. J. h gp. An antimicrobial peptide from the Australian native Hardenbergia violacea provides the first functionally characterised member of a subfamily of plant defensins // Australian Journal of Plant Physiology. CSIRO PUBLISHING, 1997. T. 24, № 5. C. 571-578.

40. Park S. S. h gp. Primary structure and allergenic activity of trypsin inhibitors from the seeds of buckwheat (Fagopyrum esculentum Moench) // FEBS Letters. 1997. T. 400, № 1. C. 103107.

41. Li F. h gp. Purification and characterization of Luffin P1, a ribosome-inactivating peptide from the seeds of Luffa cylindrica // Peptides. Elsevier Inc., 2003. T. 24, № 6. C. 799-805.

42. Fujimura M. u gp. Purification, characterization, and sequencing of novel antimicrobial peptides, Tu-AMP 1 and Tu-AMP 2, from bulbs of tulip (Tulipa gesneriana L.) // Bioscience, Biotechnology and Biochemistry. 2004. T. 68, № 3. C. 571-577.

43. Teixeira F. R. u gp. Bioprospection of cationic and anionic antimicrobial peptides from bell pepper leaves for inhibition of Ralstonia solanacearum and Clavibacter michiganensis ssp. michiganensis growth // Journal of Phytopathology. 2006. T. 154, № 7-8. C. 418-421.

44. Wang S., Rao P., Ye X. Isolation and biochemical characterization of a novel leguminous defense peptide with antifungal and antiproliferative potency // Applied Microbiology and Biotechnology. 2009. T. 82, № 1. C. 79-86.

45. dos Santos I. S. u gp. Purification of a defensin isolated from Vigna unguiculata seeds, its functional expression in Escherichia coli, and assessment of its insect a-amylase inhibitory activity // Protein Expression and Purification. Elsevier Inc., 2010. T. 71, № 1. C. 8-15.

46. Kini S. G. u gp. Morintides: Cargo-free chitin-binding peptides from Moringa oleifera // BMC Plant Biology. BMC Plant Biology, 2017. T. 17, № 1. C. 1-13.

47. Craik D. J. u gp. Plant cyclotides: A unique family of cyclic and knotted proteins that defines the cyclic cystine knot structural motif // Journal of Molecular Biology. 1999. T. 294, № 5. C. 1327-1336.

48. Jennings C. u gp. Biosynthesis and insecticidal properties of plant cyclotides: The cyclic knotted proteins from Oldenlandia affinis // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2001. T. 98, № 19. C. 10614-10619.

49. Tabiasco J. u gp. Mistletoe viscotoxins increase natural killer cell-mediated cytotoxicity // European Journal of Biochemistry. 2002. T. 269, № 10. C. 2591-2600.

50. Slazak B. u gp. How does the sweet violet (Viola odorata l.) fight pathogens and pests -cyclotides as a comprehensive plant host defense system // Frontiers in Plant Science. Frontiers Media S.A., 2018. T. 9:1296, № September. C. 1296-1296.

51. Claeson P. u gp. Fractionation protocol for the isolation of polypeptides from plant biomass // Journal of Natural Products. 1998. T. 61, № 1. C. 77-81.

52. Franke B. u gp. Diverse cyclic seed peptides in the Mexican zinnia (Zinnia haageana) // Biopolymers. 2016. T. 106, № 6. C. 806-817.

53. Tam J. P. u gp. Antimicrobial peptides from plants // Pharmaceuticals. 2015. T. 8, № 4. C. 711-757.

54. Tang S. S. u gp. Antimicrobial peptides from different plant sources: Isolation, characterisation, and purification // Phytochemistry. 2018. T. 154. C. 94-105.

55. Yount N. Y., Yeaman M. R. Multidimensional signatures in antimicrobial peptides // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. National Academy of Sciences, 2004. Т. 101, № 19. С. 7363-7363.

56. Moyer T. B., Brechbill A. M., Hicks L. M. Mass Spectrometric Identification of Antimicrobial Peptides from Medicinal Seeds // Molecules. MDPI, 2021. Т. 26, № 23. С. 7304-7304.

57. Tailor R. H. и др. A Novel Family of Small Cysteine-rich Antimicrobial Peptides from Seed of Impatiens balsaminals Derived from a Single Precursor Protein // Journal of Biological Chemistry. Elsevier, 1997. Т. 272, № 39. С. 24480-24487.

58. Luckett S. и др. High-resolution structure of a potent, cyclic proteinase inhibitor from sunflower seeds // Journal of Molecular Biology. Academic Press, 1999. Т. 290, № 2. С. 525533.

59. Zhang J. и др. Exploring and exploiting plant cyclic peptides for drug discovery and development // Medicinal Research Reviews. John Wiley & Sons, Ltd, 2021. Т. 41, № 6. С. 3096-3117.

60. Финкина Е. И. и др. Пептиды системы врожденного иммунитета растений. Часть I. Структура, биологическая активность и механизмы действия // Биоорганическая химия. Pleiades Publishing Ltd, 2019. Т. 45, № 1. С. 3-16.

61. Franco O. L. Peptide promiscuity: an evolutionary concept for plant defense // FEBS letters. FEBS Lett, 2011. Т. 585, № 7. С. 995-1000.

62. Molina A. и др. Inhibition of bacterial and fungal plant pathogens by thionins of types I and II // Plant Science. 1993. Т. 92, № 2. С. 169-177.

63. Vasilchenko A. S. и др. Novel Thionins from Black Seed (Nigella sativa L.) Demonstrate Antimicrobial Activity // International Journal of Peptide Research and Therapeutics. Springer Netherlands, 2017. Т. 23, № 2. С. 171-180.

64. Terras F. R. G. и др. In Vitro Antifungal Activity of a Radish (Raphanus sativus L.) Seed Protein Homologous to Nonspecific Lipid Transfer Proteins // Plant Physiology. Oxford Academic, 1992. Т. 100, № 2. С. 1055-1058.

65. Gasser M. и др. Identification and evolution of nsLTPs in the root nodule nitrogen fixation clade and molecular response of Frankia to AgLTP24 // Sci Rep. Nature Publishing Group, 2023. Т. 13, № 1. С. 16020.

66. Fonseca-Garcia C. и др. Non-specific Lipid Transfer Proteins in Legumes and Their Participation During Root-Nodule Symbiosis // Front. Agron. Frontiers, 2021. Т. 3.

67. Ryazantsev D. Y. и др. A novel hairpin-like antimicrobial peptide from barnyard grass (Echinochloa crusgalli L.) seeds: Structure-functional and molecular-genetics characterization // Biochimie. Elsevier Masson SAS, 2014. Т. 99, № 1. С. 63-70.

68. Berrocal-Lobo M. u gp. Snakin-2, an antimicrobial peptide from potato whose gene is locally induced by wounding and responds to pathogen infection // Plant physiology. Plant Physiol,

2002. T. 128, № 3. C. 951-961.

69. Slazak B. u gp. How does the sweet violet (Viola odorata l.) fight pathogens and pests -cyclotides as a comprehensive plant host defense system // Frontiers in Plant Science. Frontiers Media S.A., 2018. T. 9:1296, № September. C. 1296.

70. Koo J. C. u gp. Two hevein homologs isolated from the seed of Pharbitis nil L. exhibit potent antifungal activity // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Protein Structure and Molecular Enzymology. Elsevier, 1998. T. 1382, № 1. C. 80-90.

71. Fujimura M. u gp. Purification, Characterization, and Sequencing of a Novel Type of Antimicrobial Peptides, Fa-AMP1 and Fa-AMP2, from Seeds of Buckwheat (Fagopyrum esculentum Moench.) // Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. Oxford Academic,

2003. T. 67, № 8. C. 1636-1642.

72. Broekaert W. F. u gp. Antimicrobial Peptides from Amaranthus Caudatus Seeds with Sequence Homology to the Cysteine/Glycine-Rich Domain of Chitin-Binding Proteins // Biochemistry. 1992. T. 31, № 17. C. 4308-4314.

73. Rogozhin E. A. u gp. A novel antifungal peptide from leaves of the weed Stellaria media L // Biochimie. Elsevier Ltd, 2015. T. 116. C. 125-132.

74. Huang R. H. u gp. Two novel antifungal peptides distinct with a five-disulfide motif from the bark of Eucommia ulmoides Oliv // FEBS Letters. John Wiley & Sons, Ltd, 2002. T. 521, № 1-3. C. 87-90.

75. Odintsova T. I. u gp. A novel antifungal hevein-type peptide from Triticum kiharae seeds with a unique 10-cysteine motif // FEBS Journal. 2009. T. 276, № 15. C. 4266-4275.

76. Carvalho A. de O., Gomes V. M. Plant Defensins and Defensin-Like Peptides - Biological Activities and Biotechnological Applications // Current Pharmaceutical Design. Bentham Science Publishers Ltd., 2012. T. 17, № 38. C. 4270-4293.

77. Maldonado A. M. u gp. A putative lipid transfer protein involved in systemic resistance signalling in Arabidopsis // Nature 2002 419:6905. Nature Publishing Group, 2002. T. 419, № 6905. C.399-403.

78. Asano T. u gp. The secreted antifungal protein thionin 2.4 in Arabidopsis thaliana suppresses the toxicity of a fungal fruit body lectin from Fusarium graminearum // PLoS pathogens. PLoS Pathog, 2013. T. 9, № 8.

79. Silva M. S. u gp. Review: Potential biotechnological assets related to plant immunity modulation applicable in engineering disease-resistant crops // Plant Science. Elsevier, 2018. T. 270. C. 72-84.

80. Marcos J. F. h gp. Identification and Rational Design of Novel Antimicrobial Peptides for Plant Protection // Annu. Rev. Phytopathol. 2008. № 46. C. 273-301.

81. Moretta A. h gp. Antimicrobial Peptides: A New Hope in Biomedical and Pharmaceutical Fields // Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. Frontiers Media S.A., 2021. T. 11. C. 668632.

82. Lima A. M. h gp. Plant antimicrobial peptides: An overview about classification, toxicity and clinical applications // International Journal of Biological Macromolecules. Elsevier B.V., 2022. T. 214, № April. C. 10-21.

83. Berthelot K., Peruch F., Lecomte S. Highlights on Hevea brasiliensis (pro)hevein proteins // Biochimie. Elsevier, 2016. T. 127. C. 258-270.

84. Arora R. h gp. Pathogenesis related proteins: A defensin for plants but an allergen for humans // International Journal of Biological Macromolecules. Elsevier, 2020. T. 157. C. 659-672.

85. Amador V. C. h gp. Lipid Transfer Proteins (LTPs)—Structure, Diversity and Roles beyond Antimicrobial Activity // Antibiotics. 2021. T. 10, № 11. C. 1281.

86. Hong K. h gp. The thionin family of antimicrobial peptides // PLoS ONE. Public Library of Science, 2021. T. 16, № 7 July.

87. Konopa J., Woynarowski J. M., Lewandowska-gumieniak M. Isolation of viscotoxins: Cytotoxic basic polypeptides from Viscum album L. // Hoppe-Seyler's Zeitschrift fur Physiologische Chemie. 1980. T. 361, № 2. C. 1525-1534.

88. Johansson S. h gp. Small, novel proteins from the mistletoe Phoradendron tomentosum exhibit highly selective cytotoxicity to human breast cancer cells // Cellular and Molecular Life Sciences. 2003. T. 60, № 1. C. 165-175.

89. Li S. S. h gp. Ligatoxin B, a new cytotoxic protein with a novel helix-turn-helix DNA-binding domain from the mistletoe Phoradendron liga // Biochemical Journal. 2002. T. 366, № 2. C. 405-413.

90. Samuelsson G. Mistletoe toxins // Systematic Zoology. 1973. T. 22, № 4. C. 566-596.

91. Vernon L. P. h gp. A toxic thionin from Pyrularia pubera: Purification, properties, and amino acid sequence // Archives of Biochemistry and Biophysics. 1985. T. 238, № 1. C. 18-29.

92. Milbradt A. G. h gp. Structural characterization of hellethionins from Helleborus purpurascens // Biochemistry. 2003. T. 42, № 8. C. 2404-2411.

93. Leebens-Mack J. H. h gp. One thousand plant transcriptomes and the phylogenomics of green plants // Nature 2019 574:7780. Nature Publishing Group, 2019. T. 574, № 7780. C. 679-685.

94. Samuelsson G. h gp. The amino acid sequence of oxidized viscotoxin A3 from the European mistletoe (Viscum album L, Loranthaceae) // Acta chemica Scandinavica. Acta Chem Scand, 1968. T. 22, № 8. C. 2624-2642.

95. Ohtani K. и др. Complete Primary Structures of Two Subunits of Purothionin A, a Lethal Protein for Brewer's Yeast from Wheat Flour // The Journal of Biochemistry. Oxford Academic, 1977. Т. 82, № 3. С. 753-767.

96. Molina A. и др. Inhibition of bacterial and fungal plant pathogens by thionins of types I and II // Plant Science. 1993. Т. 92, № 2. С. 169-177.

97. Giudici M. и др. Antifungal effects and mechanism of action of viscotoxin A3 // FEBS Journal. 2006. Т. 273, № 1. С. 72-83.

98. Li S. и др. DNA-binding domain from the mistletoe Phoradendron liga. 2002. Т. 413. С. 405413.

99. Финкина Е. И. и др. Пептиды системы врожденного иммунитета растений. Часть II. Биосинтез, биологические функции и возможное практическое применение // Биоорганическая химия. Pleiades Publishing Ltd, 2019. Т. 45, № 2. С. 115-126.

100. Rao U., Stec B., Teeter M. M. Refinement of purothionins reveals solute particles important for lattice formation and toxicity. Part 1: alpha1-purothionin revisited // Acta crystallographica. Section D, Biological crystallography. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr, 1995. Т. 51, № Pt 6. С. 904-913.

101. Stec B., Rao U., Teeter M. M. Refinement of purothionins reveals solute particles important for lattice formation and toxicity. Part 2: Structure of beta-purothionin at 1.7 Angstrom resolution // Acta Crystallographica Section D: Biological Crystallography. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr, 1995. Т. 51, № 6. С. 914-924.

102. Stec B. и др. Proposal for molecular mechanism of thionins deduced from physicochemical studies of plant toxins // Journal of Peptide Research. 2004. Т. 64, № 6. С. 210-224.

103. Hughes P. и др. The cytotoxic plant protein, P-purothionin, forms ion channels in lipid membranes // Journal of Biological Chemistry. 2000. Т. 275, № 2. С. 823-827.

104. Richard J. A. и др. Interaction between P-purothionin and dimyristoylphosphatidylglycerol: A 31P-NMR and infrared spectroscopic study // Biophysical Journal. 2002. Т. 83, № 4. С. 2074-2083.

105. Richard J. A. и др. Structure of P-purothionin in membranes: A two-dimensional infrared correlation spectroscopy study // Biochemistry. American Chemical Society, 2005. Т. 44, № 1. С. 52-61.

106. Caaveiro J. M. M. и др. Interaction of wheat a-thionin with large unilamellar vesicles // Protein Science. Cambridge University Press, 1998. Т. 7, № 12. С. 2567-2577.

107. Vila-Perello M. и др. Synthetic and structural studies on Pyrularia pubera thionin: A single-residue mutation enhances activity against Gram-negative bacteria // FEBS Letters. 2003. Т. 536, № 1-3. С. 215-219.

108. Oard S., Karki B. Mechanism of P-purothionin antimicrobial peptide inhibition by metal ions: Molecular dynamics simulation study // Biophysical Chemistry. Elsevier, 2006. T. 121, № 1. C. 30-43.

109. Oard S., Karki B., Enright F. Is there a difference in metal ion-based inhibition between members of thionin family: Molecular dynamics simulation study // Biophysical Chemistry. Elsevier, 2007. T. 130, № 1-2. C. 65-75.

110. Oard S. V., Enright F. M., Li B. Structural changes induced in thionins by chloride anions as determined by molecular dynamics simulations // Biophysical Chemistry. Elsevier, 2010. T. 147, № 1-2. C. 42-52.

111. Stec B. Plant thionins - The structural perspective // Cellular and Molecular Life Sciences. 2006. T. 63, № 12. C. 1370-1385.

112. Osorio e Castro V. R., Vernon L. P. Hemolytic activity of thionin from Pyrularia pubera nuts and snake venom toxins of Naja naja species: Pyrularia thionin and snake venom cardiotoxin compete for the same membrane site // Toxicon. 1989. T. 27, № 5. C. 511-517.

113. Xie J. h gp. Neurotoxic and cytotoxic peptides underlie the painful stings of the tree nettle Urtica ferox // Journal of Biological Chemistry. American Society for Biochemistry and Molecular Biology Inc., 2022. T. 298, № 8. C. 102218.

114. Delp G. h gp. Microarray analysis of the interaction between the aphid Rhopalosiphum padi and host plants reveals both differences and similarities between susceptible and partially resistant barley lines // Molecular Genetics and Genomics. Springer, 2009. T. 281, № 3. C. 233-248.

115. Leybourne D. J. h gp. Defence gene expression and phloem quality contribute to mesophyll and phloem resistance to aphids in wild barley // Journal of Experimental Botany. Oxford University Press, 2019. T. 70, № 15. C. 4011-4026.

116. Ganz T. h gp. Defensins. Natural peptide antibiotics of human neutrophils. // Journal of Clinical Investigation. American Society for Clinical Investigation, 1985. T. 76, № 4. C. 1427.

117. Lambert J. h gp. Insect immunity: isolation from immune blood of the dipteran Phormia terranovae of two insect antibacterial peptides with sequence homology to rabbit lung macrophage bactericidal peptides. // Proceedings of the National Academy of Sciences. Proceedings of the National Academy of Sciences, 1989. T. 86, № 1. C. 262-266.

118. Mendez E. h gp. Primary structure and inhibition of protein synthesis in eukaryotic cellfree system of a novel thionin, y-hordothionin, from barley endosperm // European Journal of Biochemistry. 1990. T. 194, № 2. C. 533-539.

119. Bruix M. и др. Solution structure of .gamma.1-H and .gamma.1-P thionins from barley and wheat endosperm determined by proton NMR: a structural motif common to toxic arthropod proteins // Biochemistry. American Chemical Society, 1993. Т. 32, № 2. С. 715-724.

120. Terras F. R. G. и др. Analysis of two novel classes of plant antifungal proteins from radish (Raphanus sativus L.) seeds // Journal of Biological Chemistry. Elsevier, 1992. Т. 267, № 22. С.15301-15309.

121. Broekaert W. F. и др. Plant defensins: novel antimicrobial peptides as components of the host defense system. // Plant Physiology. Oxford University Press, 1995. Т. 108, №2 4. С. 1353.

122. Shafee T. M. A. и др. The Defensins Consist of Two Independent, Convergent Protein Superfamilies // Molecular Biology and Evolution. Oxford University Press, 2016. Т. 33, № 9. С. 2345-2356.

123. Janssen B. J. C. и др. Structure of Petunia hybrida Defensin 1, a Novel Plant Defensin with Five Disulfide Bonds f. 2003.

124. van der Weerden N. L., Anderson M. A. Plant defensins: Common fold, multiple functions // Fungal Biology Reviews. Elsevier Ltd, 2013. Т. 26, № 4. С. 121-131.

125. Fant F. и др. Determination of the three-dimensional solution structure of Raphanus sativus antifungal protein 1 by 1H NMR // Journal of molecular biology. J Mol Biol, 1998. Т. 279, № 1. С. 257-270.

126. Walters D. E. и др. Design and Evaluation of New Analogs of the Sweet Protein Brazzein // Chem Senses. 2009. Т. 34, № 8. С. 679-683.

127. Carvalho A. de O., Gomes V. M. Plant Defensins and Defensin-Like Peptides - Biological Activities and Biotechnological Applications // Current Pharmaceutical Design. Bentham Science Publishers Ltd., 2012. Т. 17, № 38. С. 4270-4293.

128. Segura A. и др. Novel defensin subfamily from spinach (Spinacia oleracea) // FEBS Letters. John Wiley & Sons, Ltd, 1998. Т. 435, № 2-3. С. 159-162.

129. Harrison S. J. и др. An antimicrobial peptide from the Australian native Hardenbergia violacea provides the first functionally characterised member of a subfamily of plant defensins // Australian Journal of Plant Physiology. CSIRO PUBLISHING, 1997. Т. 24, № 5. С. 571578.

130. Lay F., Anderson M. Defensins - Components of the Innate Immune System in Plants // Current Protein & Peptide Science. 2005. Т. 6, № 1. С. 85-101.

131. Финкина Е. И., Овчинникова Т. В. Дефенсины Растений: Структура, Функции, Биосинтез И Роль В Иммунном Ответе // Биоорганическая Химия. 2018. Т. 44, № 3. С. 247-266.

132. Mirouze M. u gp. A putative novel role for plant defensins: a defensin from the zinc hyper-accumulating plant, Arabidopsis hallen, confers zinc tolerance // The Plant journal: for cell and molecular biology. Plant J, 2006. T. 47, № 3. C. 329-342.

133. Dresselhaus T., Marton M. L. Micropylar pollen tube guidance and burst: adapted from defense mechanisms? // Current Opinion in Plant Biology. Elsevier Current Trends, 2009. T. 12, № 6. C. 773-780.

134. De Samblanx G. W. u gp. Mutational analysis of a plant defensin from radish (Raphanus sativus L.) reveals two adjacent sites important for antifungal activity // Journal of Biological Chemistry. Elsevier, 1997. T. 272, № 2. C. 1171-1179.

135. Kushmerick C. u gp. Functional and structural features of y-zeathionins, a new class of sodium channel blockers // FEBS Letters. No longer published by Elsevier, 1998. T. 440, № 3. C. 302-306.

136. Spelbrink R. G. u gp. Differential Antifungal and Calcium Channel-Blocking Activity among Structurally Related Plant Defensins // Plant Physiology. Oxford Academic, 2004. T. 135, № 4. C. 2055-2067.

137. Lin K. F. u gp. Structure-based protein engineering for alpha-amylase inhibitory activity of plant defensin // Proteins. Proteins, 2007. T. 68, № 2. C. 530-540.

138. Aerts A. M. u gp. The antifungal plant defensin RsAFP2 from radish induces apoptosis in a metacaspase independent way in Candida albicans // FEBS Letters. No longer published by Elsevier, 2009. T. 583, № 15. C. 2513-2516.

139. Chiapparino A. u gp. The orchestra of lipid-transfer proteins at the crossroads between metabolism and signaling // Progress in Lipid Research. Pergamon, 2016. T. 61. C. 30-39.

140. Kader J. C. Lipid-transfer proteins in plants // Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular Biology. Annual Reviews 4139 El Camino Way, P.O. Box 10139, Palo Alto, CA 94303-0139, USA, 1996. T. 47, № 1. C. 627-654.

141. Lindorff-Larsen K., Winther J. R. Surprisingly high stability of barley lipid transfer protein, LTP1, towards denaturant, heat and proteases // FEBS Letters. 2001. T. 488, № 3. C. 145-148.

142. Berecz B. u gp. Structural stability and surface activity of sunflower 2S albumins and nonspecific lipid transfer protein // Journal of agricultural and food chemistry. J Agric Food Chem, 2010. T. 58, № 10. C. 6490-6497.

143. Kader J. C. Proteins and the intracellular exchange of lipids: I. stimulation of phospholipid exchange between mitochondria and microsomal fractions by proteins isolated from potato tuber // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Lipids and Lipid Metabolism. Elsevier, 1975. T. 380, № 1. C. 31-44.

144. Edstam M. M. и др. Evolutionary history of the non-specific lipid transfer proteins // Molecular Plant. Mol Plant, 2011. Т. 4, № 6. С. 947-964.

145. Fleury C. и др. Comprehensive classification of the plant non-specific lipid transfer protein superfamily towards its sequence-structure-function analysis // PeerJ. PeerJ, Inc, 2019. Т. 7, № 8.

146. Huang M.-D. и др. The revealing of a novel lipid transfer protein lineage in green algae // BMC Plant Biology. 2023. Т. 23, № 1. С. 21.

147. Boutrot F., Chantret N., Gautier M. F. Genome-wide analysis of the rice and arabidopsis non-specific lipid transfer protein (nsLtp) gene families and identification of wheat nsLtp genes by EST data mining // BMC Genomics. 2008. Т. 9.

148. Boutrot F. и др. Wheat non-specific lipid transfer protein genes display a complex pattern of expression in developing seeds // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Gene Structure and Expression. Elsevier, 2005. Т. 1730, № 2. С. 114-125.

149. Li J. и др. Genome-Wide Survey and Expression Analysis of the Putative Non-Specific Lipid Transfer Proteins in Brassica rapa L // PLOS ONE. Public Library of Science, 2014. Т. 9, № 1. С. e84556.

150. Wei K., Zhong X. Non-specific lipid transfer proteins in maize // BMC Plant Biology. BioMed Central Ltd., 2014. Т. 14, № 1. С. 1-18.

151. Salminen T. A., Blomqvist K., Edqvist J. Lipid transfer proteins: classification, nomenclature, structure, and function // Planta. Springer Berlin Heidelberg, 2016. Т. 244, № 5. С. 971-997.

152. Wang S. Y. и др. A non-specific lipid transfer protein with antifungal and antibacterial activities from the mung bean // Peptides. Elsevier Inc., 2004. Т. 25, № 8. С. 1235-1242.

153. Isaac Kirubakaran S. и др. Characterization of a new antifungal lipid transfer protein from wheat // Plant Physiology and Biochemistry. Plant Physiol Biochem, 2008. Т. 46, № 10. С. 918-927.

154. Рогожин Е. А. и др. Выделение и характеристика нового липид-переносящего белка из зерновок ежовника обыкновенного (Echinochloa crusgalli) // Прикладная биохимия и микробиология. 2009. № 45. С. 403-409.

155. Regente M. C. и др. The cytotoxic properties of a plant lipid transfer protein involve membrane permeabilization of target cells // Letters in applied microbiology. Lett Appl Microbiol, 2005. Т. 40, № 3. С. 183-189.

156. Sarowar S. и др. Overexpression of lipid transfer protein (LTP) genes enhances resistance to plant pathogens and LTP functions in long-distance systemic signaling in tobacco // Plant Cell Reports. 2009. Т. 28, № 3. С. 419-427.

157. Wang C. и др. A nonspecific lipid transfer protein, StLTP10, mediates resistance to Phytophthora infestans in potato // Molecular Plant Pathology. John Wiley & Sons, Ltd, 2021. Т. 22, № 1. С. 48-63.

158. Rogozhin E. A. и др. Defense peptides from barnyard grass (Echinochloa crusgalli L.) seeds // Peptides. Peptides, 2012. Т. 38, № 1. С. 33-40.

159. Molina A., Segura A., García-Olmedo F. Lipid transfer proteins (nsLTPs) from barley and maize leaves are potent inhibitors of bacterial and fungal plant pathogens // FEBS Letters. 1993. Т. 316, № 2. С. 119-122.

160. Segura A., Moreno M., García-Olmedo F. Purification and antipathogenic activity of lipid transfer proteins (LTPs) from the leaves of Arabidopsis and spinach // FEBS Letters. No longer published by Elsevier, 1993. Т. 332, № 3. С. 243-246.

161. Cammue B. P. A. и др. A Potent Antimicrobial Protein from Onion Seeds Showing Sequence Homology to Plant Lipid Transfer Proteins // Plant Physiology. Oxford Academic, 1995. Т. 109, № 2. С. 445-455.

162. Ji J. и др. Cowpea lipid transfer protein 1 regulates plant defense by inhibiting the cysteine protease of cowpea mosaic virus // Proceedings of the National Academy of Sciences. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2024. Т. 121, № 35. С. e2403424121.

163. Shang K. и др. Potato (Solanum tuberosum L.) non-specific lipid transfer protein StLTP6 promotes viral infection by inhibiting virus-induced RNA silencing // Planta. 2022. Т. 256, № 3. С. 54.

164. Chiu L.-Y. и др. The Lipid Transfer Protein 1 from Nicotiana benthamiana Assists Bamboo mosaic virus Accumulation // Viruses. 2020. Т. 12, № 12. С. 1361.

165. Финкина Е. И. и др. Белки системы врожденного иммунитета растений, осуществляющие транспорт липидов: структура, функции и практическое применение // Acta Naturae. 2016. Т. 2, № 29. С. 53-69.

166. Alshammari S. O. и др. Cytotoxic activity of non-specific lipid transfer protein (nsLTP1) from Ajwain (Trachyspermum ammi) seeds // BMC Complement Med Ther. 2022. Т. 22, № 1. С. 135.

167. Megeressa M. и др. Structural characterization and in vitro lipid binding studies of nonspecific lipid transfer protein 1 (nsLTP1) from fennel (Foeniculum vulgare) seeds // Sci Rep. 2020. Т. 10. С. 21243.

168. McLaughlin J. E. и др. A lipid transfer protein has antifungal and antioxidant activity and suppresses fusarium head blight disease and DON accumulation in transgenic wheat // Phytopathology. American Phytopathological Society, 2021. Т. 111, № 4. С. 671-683.

169. Safi H. u gp. A wheat lipid transfer protein (TdLTP4) promotes tolerance to abiotic and biotic stress in Arabidopsis thaliana // Plant Physiology and Biochemistry. Elsevier Masson, 2015. T. 89. C. 64-75.

170. Tassin-Moindrot S. u gp. The wide binding properties of a wheat nonspecific lipid transfer protein. Solution structure of a complex with prostaglandin B2 // European journal of biochemistry. Eur J Biochem, 2000. T. 267, № 4. C. 1117-1124.

171. Olivieri B., Skypala I. J. The Diagnosis of Allergy to Lipid Transfer Proteins // Current Allergy and Asthma Reports. Springer, 2024. T. 24, № 9. C. 509-518.

172. Van Winkle R. C., Chang C. The biochemical basis and clinical evidence of food allergy due to lipid transfer proteins: A comprehensive review // Clinical Reviews in Allergy and Immunology. Humana Press Inc., 2014. T. 46, № 3. C. 211-224.

173. Skypala I. J. u gp. Non-specific lipid-transfer proteins: Allergen structure and function, cross-reactivity, sensitization, and epidemiology // Clinical and translational allergy. Clin Transl Allergy, 2021. T. 11, № 3.

174. Skypala I. J. u gp. The diagnosis and management of allergic reactions in patients sensitized to non-specific lipid transfer proteins // Allergy. John Wiley & Sons, Ltd, 2021. T. 76, № 8. C. 2433-2446.

175. Rodriguez M. J. u gp. Pru p 3-Epitope-based sublingual immunotherapy in a murine model for the treatment of peach allergy // Molecular nutrition & food research. Mol Nutr Food Res, 2017. T. 61, № 10.

176. Duvick J. P. u gp. Purification and characterization of a novel antimicrobial peptide from maize (Zea mays L.) kernels // Journal of Biological Chemistry. Elsevier, 1992. T. 267, № 26. C.18814-18820.

177. Oparin P. B. u gp. Buckwheat trypsin inhibitor with helical hairpin structure belongs to a new family of plant defence peptides // Biochemical Journal. Portland Press, 2012. T. 446, № 1. C. 69-77.

178. Slavokhotova A. A., Rogozhin E. A. Defense Peptides From the a-Hairpinin Family Are Components of Plant Innate Immunity // Frontiers in Plant Science. Frontiers, 2020. T. 11. C. 465.

179. Marcus J. P. u gp. A family of antimicrobial peptides is produced by processing of a 7S globulin protein in Macadamia integrifolia kernels // The Plant journal: for cell and molecular biology. Plant J, 1999. T. 19, № 6. C. 699-710.

180. Marcus J. P. u gp. Purification, characterisation and cDNA cloning of an antimicrobial peptide from Macadamia integrifolia // European Journal of Biochemistry. 1997. T. 244, № 3. C. 743-749.

181. Ryazantsev D. Y. h gp. Diversity of Harpin-Like Defense Peptides from Barnyard Grass (Echinochloa crusgalli L.) Seeds // Doklady Biochemistry and Biophysics. 2019. T. 484, № 1. C. 6-8.

182. Cui X. h gp. Inhibitory site of a-hairpinin peptide from tartary buckwheat has no effect on its antimicrobial activities // Acta Biochimica et Biophysica Sinica. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai), 2018. T. 50, № 4. C. 408-416.

183. Yamada K. h gp. Multiple functional proteins are produced by cleaving Asn-Gln bonds of a single precursor by vacuolar processing enzyme // Journal of Biological Chemistry. J Biol Chem, 1999. T. 274, № 4. C. 2563-2570.

184. Conners R. h gp. An unusual helix-turn-helix protease inhibitory motif in a novel trypsin inhibitor from seeds of Veronica (Veronica hederifolia L.) // Journal of Biological Chemistry. Elsevier, 2007. T. 282, № 38. C. 27760-27768.

185. Ng Y. M. h gp. Structural characterization and anti-HIV-1 activities of arginine/glutamate-rich polypeptide Luffin P1 from the seeds of sponge gourd (Luffa cylindrica) // Journal of structural biology. J Struct Biol, 2011. T. 174, № 1. C. 164-172.

186. Li F. h gp. Purification and characterization of Luffin P1, a ribosome-inactivating peptide from the seeds of Luffa cylindrica // Peptides. Elsevier Inc., 2003. T. 24, № 6. C. 799-805.

187. Nolde S. B. h gp. Disulfide-stabilized helical hairpin structure and activity of a novel antifungal peptide EcAMP1 from seeds of barnyard grass (Echinochloa crus-galli) // Journal of Biological Chemistry. 2011. T. 286, № 28. C. 25145-25153.

188. Berkut A. A. h gp. Structural Similarity between Defense Peptide from Wheat and Scorpion Neurotoxin Permits Rational Functional Design // Journal of Biological Chemistry. Elsevier, 2014. T. 289, № 20. C. 14331-14340.

189. Berkut A. A. h gp. Protein surface topography as a tool to enhance the selective activity of a potassium channel blocker // J Biol Chem. 2019. T. 294, № 48. C. 18349-18359.

190. Segura A. h gp. Snakin-1, a peptide from potato that is active against plant pathogens // Molecular plant-microbe interactions : MPMI. Mol Plant Microbe Interact, 1999. T. 12, № 1. C. 16-23.

191. Yeung H. h gp. Radiation Damage and Racemic Protein Crystallography Reveal the Unique Structure of the GASA/Snakin Protein Superfamily // Angewandte Chemie -International Edition. John Wiley & Sons, Ltd, 2016. T. 55, № 28. C. 7930-7933.

192. Herzog M., Dorne A. M., Grellet F. GASA, a gibberellin-regulated gene family from Arabidopsis thaliana related to the tomato GAST1 gene // Plant molecular biology. Plant Mol Biol, 1995. T. 27, № 4. C. 743-752.

193. Oliveira-Lima M. u gp. Snakin: Structure, Roles and Applications of a Plant Antimicrobial Peptide // Current Protein & Peptide Science. 2017. T. 18, № 4. C. 368-374.

194. Nahirnak V. u gp. Potato Snakin-1 gene silencing affects cell division, primary metabolism, and cell wall composition // Plant Physiology. Plant Physiol, 2012. T. 158, № 1. C.252-263.

195. De La Fuente J. I. u gp. The strawberry gene FaGAST affects plant growth through inhibition of cell elongation // Journal of experimental botany. J Exp Bot, 2006. T. 57, № 10. C.2401-2411.

196. Herbel V., Sieber-Frank J., Wink M. The antimicrobial peptide snakin-2 is upregulated in the defense response of tomatoes (Solanum lycopersicum) as part of the jasmonate-dependent signaling pathway // Journal of Plant Physiology. Urban & Fischer, 2017. T. 208. C. 1-6.

197. Su T. u gp. Molecular and Biological Properties of Snakins: The Foremost Cysteine-Rich Plant Host Defense Peptides // Journal of Fungi 2020, Vol. 6, Page 220. Multidisciplinary Digital Publishing Institute, 2020. T. 6, № 4. C. 220.

198. Wink M., De W.-H., Herbel V. Mode of action and membrane specificity of the antimicrobial peptide snakin-2 // PeerJ. PeerJ Inc., 2016. T. 4. C. e1987.

199. Rodriguez-Decuadro S. u gp. Antimicrobial and structural insights of a new snakin-like peptide isolated from Peltophorum dubium (Fabaceae) // Amino Acids. Springer-Verlag Wien, 2018. T. 50, № 9. C. 1245-1259.

200. Almasia N. I. u gp. Successful production of the potato antimicrobial peptide Snakin-1 in baculovirus-infected insect cells and development of specific antibodies // BMC Biotechnology. BioMed Central Ltd., 2017. T. 17, № 1. C. 1-11.

201. Molesini B. u gp. Plant cystine-knot peptides: pharmacological perspectives // British Journal of Clinical Pharmacology. Wiley-Blackwell, 2017. T. 83, № 1. C. 63.

202. Postic G. u gp. KNOTTIN: the database of inhibitor cystine knot scaffold after 10 years, toward a systematic structure modeling // Nucleic Acids Research. Oxford Academic, 2018. T. 46, № D1. C. D454-D458.

203. Rees D. C., Lipscomb W. N. Refined crystal structure of the potato inhibitor complex of carboxypeptidase A at 2.5 Ä resolution // Journal of Molecular Biology. 1982. T. 160, № 3. C.475-498.

204. Poth A. G. u gp. Cyclotides associate with leaf vasculature and are the products of a novel precursor in Petunia (Solanaceae) // Journal of Biological Chemistry. 2012. T. 287, № 32. C. 27033-27046.

205. Colgrave M. L., Craik D. J. Thermal, chemical, and enzymatic stability of the cyclotide kalata B1: The importance of the cyclic cystine knot // Biochemistry. American Chemical Society, 2004. T. 43, № 20. C. 5965-5975.

206. Burman R. h gp. Chemistry and biology of cyclotides: Circular plant peptides outside the box // Journal of Natural Products. 2014. T. 77, № 3. C. 724-736.

207. Pallaghy P. K. h gp. A common structural motif incorporating a cystine knot and a triple-stranded P-sheet in toxic and inhibitory polypeptides // Protein Science. Wiley-Blackwell, 1994. T. 3, № 10. C. 1833-1839.

208. Gran L. On the Effect of a Polypeptide Isolated from "Kalata-Kalata" (Oldenlandia affinis DC) on the Oestrogen Dominated Uterus // Acta Pharmacologica et Toxicologica. 1973. T. 33, № 5-6. C. 400-408.

209. Gran L., Sletten K., Skjeldal L. Cyclic peptides from Oldenlandia affinis DC. Molecular and biological properties // Chemistry and Biodiversity. 2008. T. 5, № 10. C. 2014-2022.

210. Gustafson K. R. h gp. Circulins A and B: Novel HlV-Inhibitory Macrocyclic Peptides from the Tropical Tree Chassalia parnifolia // Journal of the American Chemical Society. American Chemical Society, 1994. T. 116, № 20. C. 9337-9338.

211. Witherup K. M. h gp. Cyclopsychotride a, a biologically active, 31-residue cyclic peptide isolated from psychotria longipes // Journal of Natural Products. American Chemical Society, 1994. T. 57, № 12. C. 1619-1625.

212. Goransson U. h gp. Seven novel macrocyclic polypeptides from Viola arvensis // Journal of Natural Products. 1999. T. 62, № 2. C. 283-286.

213. Weidmann J., Craik D. J. Discovery, structure, function, and applications of cyclotides: Circular proteins from plants // Journal of Experimental Botany. 2016. T. 67, № 16. C. 48014812.

214. Huang Y. H., Du Q., Craik D. J. Cyclotides: Disulfide-rich peptide toxins in plants // Toxicon. Elsevier B.V., 2019. T. 172. C. 33-44.

215. Basse C. W. Dissecting defense-related and developmental transcriptional responses of maize during Ustilago maydis infection and subsequent tumor formation // Plant physiology. Plant Physiol, 2005. T. 138, № 3. C. 1774-1784.

216. Tam J. P. h gp. An unusual structural motif of antimicrobial peptides containing end-to-end macrocycle and cystine-knot disulfides // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 1999. T. 96, № 16. C. 8913-8918.

217. Craik D. J., Mylne J. S., Daly N. L. Cyclotides: macrocyclic peptides with applications in drug design and agriculture // Cellular and molecular life sciences : CMLS. Cell Mol Life Sci, 2010. T. 67, № 1. C. 9-16.

218. Barbeta B. L. и др. Plant cyclotides disrupt epithelial cells in the midgut of lepidopteran larvae // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. National Academy of Sciences, 2008. Т. 105, № 4. С. 1221-1225.

219. Plan M. R. R. и др. Backbone cyclised peptides from plants show molluscicidal activity against the rice pest Pomacea canaliculata (golden apple snail) // Journal of agricultural and food chemistry. J Agric Food Chem, 2008. Т. 56, № 13. С. 5237-5241.

220. Henriques S. T. и др. The Prototypic Cyclotide Kalata B1 Has a Unique Mechanism of Entering Cells // Chemistry and Biology. 2015. Т. 22, № 8. С. 1087-1097.

221. Henriques S. T. и др. Decoding the membrane activity of the cyclotide kalata B1: The importance of phosphatidylethanolamine phospholipids and lipid organization on hemolytic and anti-HIV activities // Journal of Biological Chemistry. 2011. Т. 286, № 27. С. 2423124241.

222. Greenwood K. P. и др. The cyclic cystine knot miniprotein MCoTI-II is internalized into cells by macropinocytosis // International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 2007. Т. 39, № 12. С. 2252-2264.

223. Gunasekera S. и др. Engineering stabilized vascular endothelial growth factor-A antagonists: synthesis, structural characterization, and bioactivity of grafted analogues of cyclotides // Journal of medicinal chemistry. J Med Chem, 2008. Т. 51, № 24. С. 7697-7704.

224. Salehi H., Bahramnejad B., Majdi M. Induction of two cyclotide-like genes Zmcyc1 and Zmcyc5 by abiotic and biotic stresses in Zea mays // Acta Physiologiae Plantarum 2017 39:6. Springer, 2017. Т. 39, № 6. С. 1-15.

225. The Revolutionary Bee-friendly Insecticide [Электронный ресурс]. URL: https://www.greenlifeindustry.com.au/communications-centre-content/media-releases-1/2021/the-revolutionary-bee-friendly-insecticide (дата обращения: 18.01.2025).

226. Archer B. L. The proteins of Hevea brasiliensis Latex. 4. Isolation and characterization of crystalline hevein. // The Biochemical journal. 1960. Т. 75. С. 236-240.

227. van Parijs J. и др. Hevein: an antifungal protein from rubber-tree (Hevea brasiliensis) latex // Planta. 1991. Т. 183, № 2. С. 258-264.

228. Славохотова А. А., Одинцова Т. И. Гевеиноподоные антимикробные пептиды растений // Успехи биологической химии. 2017. № 57. С. 209-244.

229. Wong K. H. и др. Vaccatides: Antifungal glutamine-rich hevein-like peptides from Vaccaria hispanica // Frontiers in Plant Science. 2017. Т. 8:1100, № June.

230. Tam J. P. и др. Antimicrobial peptides from plants // Pharmaceuticals. 2015. Т. 8, № 4. С. 711-757.

231. Beintema J. J. Structural features of plant chitinases and chitin-binding proteins // FEBS letters. FEBS Lett, 1994. T. 350, № 2-3. C. 159-163.

232. Lee H. u gp. Co- and post-translational processing of the hevein preproprotein of latex of the rubber tree (Hevea brasiliensis) // Journal of Biological Chemistry. A© 1991 ASBMB. Currently published by Elsevier Inc; originally published by American Society for Biochemistry and Molecular Biology., 1991. T. 266, № 24. C. 15944-15948.

233. Andreev Y. A. u gp. Genes encoding hevein-like defense peptides in wheat: Distribution, evolution, and role in stress response // Biochimie. Elsevier, 2012. T. 94, № 4. C. 1009-1016.

234. Raikhel N. V., Lee H. I., Broekaert W. F. Structure and function of chitin-binding proteins // Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular Biology. Annual Reviews Inc., 1993. T. 44, № 1. C. 591-615.

235. Rivillas-Acevedo L. A., Soriano-Garcia M. Isolation and biochemical characterization of an antifungal peptide from Amaranthus hypochondriacus seeds // Journal of agricultural and food chemistry. J Agric Food Chem, 2007. T. 55, № 25. C. 10156-10161.

236. Lipkin A. u gp. An antimicrobial peptide Ar-AMP from amaranth (Amaranthus retroflexus L.) seeds // Phytochemistry. Phytochemistry, 2005. T. 66, № 20. C. 2426-2431.

237. Van Den Bergh K. P. B. u gp. Synergistic antifungal activity of two chitin-binding proteins from spindle tree (Euonymus europaeus L.) // Planta. Planta, 2004. T. 219, № 2. C. 221-232.

238. Utkina L. L. u gp. Heterologous expression of a synthetic gene encoding a novel hevein-type antimicrobial peptide of Leymus arenarius in Escherichia coli cells // Russian Journal of Genetics. Maik Nauka Publishing / Springer SBM, 2010. T. 46, № 12. C. 1449-1454.

239. Martins J. C. u gp. H NMR study of the solution structure of Ac-AMP2, a sugar binding antimicrobial protein isolated from Amaranthus caudatus // Journal of molecular biology. J Mol Biol, 1996. T. 258, № 2. C. 322-333.

240. Xiang Y. u gp. Crystal structure of a novel antifungal protein distinct with five disulfide bridges from Eucommia ulmoides Oliver at an atomic resolution // Journal of Structural Biology. Academic Press, 2004. T. 148, № 1. C. 86-97.

241. Dubovskii P. V. u gp. Solution structure of a defense peptide from wheat with a 10-cysteine motif // Biochemical and biophysical research communications. Biochem Biophys Res Commun, 2011. T. 411, № 1. C. 14-18.

242. Andersen N. H. u gp. Hevein: NMR Assignment and Assessment of Solution-State Folding for the Agglutinin-Toxin Motif // Biochemistry. 1993. T. 32, № 6. C. 1407-1422.

243. Naumann T. A., Wicklow D. T., Price N. P. J. Identification of a chitinase-modifying protein from Fusarium verticillioides: truncation of a host resistance protein by a fungalysin

metalloprotease // The Journal of biological chemistry. J Biol Chem, 2011. T. 286, № 41. C. 35358-35366.

244. Naumann T. A., Price N. P. J. Truncation of class IV chitinases from Arabidopsis by secreted fungal proteases // Molecular plant pathology. Mol Plant Pathol, 2012. T. 13, № 9. C. 1135-1139.

245. Craik D. J. Circling the enemy: cyclic proteins in plant defence // Trends in Plant Science. Elsevier, 2009. T. 14, № 6. C. 328-335.

246. Ooi L. S. M. h gp. Isolation, characterization, molecular cloning and modeling of a new lipid transfer protein with antiviral and antiproliferative activities from Narcissus tazetta // Peptides. Elsevier, 2008. T. 29, № 12. C. 2101-2109.

247. Mammari N. h gp. Plant-Derived Antimicrobial Peptides as Potential Antiviral Agents in Systemic Viral Infections // Pharmaceuticals 2021, Vol. 14, Page 774. Multidisciplinary Digital Publishing Institute, 2021. T. 14, № 8. C. 774.

248. Deepthi V., Mohanakumar K. P., Rajamma U. Efficacy of defensins as neutralizing agents against the deadly SARS-CoV-2 // Journal of Biomolecular Structure and Dynamics. Taylor & Francis, 2023. T. 41, № 7. C. 2911-2925.

249. Sohal A. K. h gp. Cauliflower mosaic virus infection stimulates lipid transfer protein gene expression in Arabidopsis // Journal of Experimental Botany. Oxford Academic, 1999. T. 50, № 341. C.1727-1733.

250. Kushwaha N. h gp. Chilli leaf curl virus infection highlights the differential expression of genes involved in protein homeostasis and defense in resistant chilli plants // Applied Microbiology and Biotechnology. Springer Verlag, 2015. T. 99, № 11. C. 4757-4770.

251. Poon I. K. H. h gp. Phosphoinositide-mediated oligomerization of a defensin induces cell lysis // eLife. Elife, 2014. T. 3, № 3.

252. García A. N. h gp. Alfalfa snakin-1 prevents fungal colonization and probably coevolved with rhizobia // BMC Plant Biology. BioMed Central Ltd., 2014. T. 14, № 1. C. 1-13.

253. Odintsova T. I. h gp. Defensin-like peptides in wheat analyzed by whole-transcriptome sequencing: A focus on structural diversity and role in induced resistance // PeerJ. PeerJ Inc., 2019. T. 2019, № 1.

254. Molina A., García-Olmedo F. Enhanced tolerance to bacterial pathogens caused by the transgenic expression of barley lipid transfer protein LTP2 // The Plant journal: for cell and molecular biology. Plant J, 1997. T. 12, № 3. C. 669-675.

255. Jha S., Chattoo B. B. Expression of a plant defensin in rice confers resistance to fungal phytopathogens // Transgenic research. Transgenic Res, 2010. T. 19, № 3. C. 373-384.

256. Muramoto N., Tanaka T., Shimamura T. Transgenic sweet potato expressing thionin from barley gives resistance to black rot disease caused by Ceratocystis fimbriata in leaves and storage roots // Plant Cell Reports. 2012. № 31. C. 987-997.

257. Thevissen K. h gp. Fungal membrane responses induced by plant defensins and thionins // Journal of Biological Chemistry. 1996. T. 271, № 25. C. 15018-15025.

258. Swathi Anuradha T. h gp. Transgenic tobacco and peanut plants expressing a mustard defensin show resistance to fungal pathogens // Plant Cell Reports. Springer, 2008. T. 27, № 11. C. 1777-1786.

259. Abdallah N. A. h gp. Stable integration and expression of a plant defensin in tomato confers resistance to fusarium wilt. // GM crops. GM Crops, 2010. T. 1, № 5. C. 344-350.

260. Ghag S. B., Shekhawat U. K. S., Ganapathi T. R. Petunia Floral Defensins with Unique Prodomains as Novel Candidates for Development of Fusarium Wilt Resistance in Transgenic Banana Plants // PLOS ONE. Public Library of Science, 2012. T. 7, № 6. C. e39557.

261. Cray J. A. h gp. Biocontrol agents promote growth of potato pathogens, depending on environmental conditions // Microbial Biotechnology. John Wiley and Sons Ltd, 2016. T. 9, № 3. C.330-354.

262. Taveira G. B. h gp. Programmed cell death in yeast by thionin-like peptide from Capsicum annuum fruits involving activation of caspases and extracellular H + flux // Bioscience Reports. 2018. № 38.

263. Mello E. O. h gp. Antifungal activity of PvD1 defensin involves plasma membrane permeabilization, inhibition of medium acidification, and induction of ROS in fungi cells // Current Microbiology. Springer, 2011. T. 62, № 4. C. 1209-1217.

264. Thevissen K. h gp. The plant defensin RsAFP2 induces cell wall stress, septin mislocalization and accumulation of ceramides in Candida albicans // Molecular Microbiology. John Wiley & Sons, Ltd, 2012. T. 84, № 1. C. 166-180.

265. Vasilchenko A. S. h gp. Novel Thionins from Black Seed (Nigella sativa L.) Demonstrate Antimicrobial Activity // International Journal of Peptide Research and Therapeutics. Springer Netherlands, 2017. T. 23, № 2. C. 171-180.

266. Rogozhin E. A. h gp. Novel antifungal defensins from Nigella sativa L. seeds // Plant Physiology and Biochemistry. Elsevier Masson SAS, 2011. T. 49, № 2. C. 131-137.

267. Rogozhin E. A. h gp. A novel lipopeptaibol emericellipsin a with antimicrobial and antitumor activity produced by the extremophilic fungus emericellopsis alkalina // Molecules. 2018. T. 23, № 11.

268. Alferova V. A. и др. Astolides A and B, antifungal and cytotoxic naphthoquinone-derived polyol macrolactones from Streptomyces hygroscopicus // Tetrahedron. Elsevier Ltd, 2018. Т. 74, № 52. С. 7442-7449.

269. Arendrup M. C. и др. EUCAST Technical Note on Aspergillus and amphotericin B, itraconazole, and posaconazole // Clinical Microbiology and Infection. Blackwell Publishing Ltd, 2012. Т. 18, № 7.

270. Odintsova T. I. и др. Seed defensins from T. kiharae and related species: Genome localization of defensin-encoding genes // Biochimie. 2007. Т. 89, № 5. С. 605-612.

271. Rogozhin E. A. и др. Peptide extracts from seven medicinal plants discovered to inhibit oomycete phytophthora infestans, a causative agent of potato late blight disease // Plants. 2020. Т. 9, № 10. С. 1-15.

272. Shckorbatov Y. G. и др. The influence of differently polarised microwave radiation on chromatin in human cells // International Journal of Radiation Biology. Int J Radiat Biol, 2009. Т. 85, № 4. С. 322-329.

273. Montal M., Mueller P. Formation of Bimolecular Membranes from Lipid Monolayers and a Study of Their Electrical Properties // Proceedings of the National Academy of Sciences. Proceedings of the National Academy of Sciences, 1972. Т. 69, № 12. С. 3561-3566.

274. Juhasz J., Davis J. H., Sharom F. J. Fluorescent probe partitioning in giant unilamellar vesicles of «lipid raft» mixtures // The Biochemical journal. Biochem J, 2010. Т. 430, № 3. С. 415-423.

275. Гойман Э. Инфекционные болезни растений. г. Москва: Издательство Иностранной литературы, 1954.

276. Oshchepkova Y. I. и др. Isolation of the lipid-transporting protein Ns-LTP1 from seeds of the garden fennel flower (Nigella sativa) // Russian Journal of Bioorganic Chemistry. Springer, 2009. Т. 35, № 3. С. 315-319.

277. Ощепкова Ю. И. и др. Выделение липидпереносящего белка NsLTP-1 из семян чернушки посевной (Nigella sativa) // Биоорганическая Химия. 2009. Т. 3, № 35. С. 344349.

278. Odintsova T. I., Slezina M. P., Istomina E. A. Plant thionins: Structure, biological functions and potential use in biotechnology // Vavilovskii Zhurnal Genetiki i Selektsii. 2018. Т. 22, № 6. С. 667-675.

279. Xiao Q. и др. Protein N-terminal processing: Substrate specificity of escherichia coli and human methionine aminopeptidases // Biochemistry. American Chemical Society, 2010. Т. 49, № 26. С. 5588-5599.

280. Кулько В. Б. и др. Исследование тионинов семян черного тмина (Nigella sativa), обладающих цитотоксической, регуляторной и антифунгальной активностью // Антибиотики и Химиотерапия. 2016. Т. 61, № 9-10. С. 8-16.

281. Tang S. S. и др. Antimicrobial peptides from different plant sources: Isolation, characterisation, and purification // Phytochemistry. 2018. Т. 154. С. 94-105.

282. Mergaert P. и др. A Novel Family in Medicago truncatula Consisting of More Than 300 Nodule-Specific Genes Coding for Small, Secreted Polypeptides with Conserved Cysteine Motifs // Plant Physiology. Oxford University Press, 2003. Т. 132, № 1. С. 161.

283. Silverstein K. A. T. и др. Genome Organization of More Than 300 Defensin-Like Genes in Arabidopsis // Plant Physiology. Oxford Academic, 2005. Т. 138, № 2. С. 600-610.

284. Meng C. и др. Systematic analysis of cotton non-specific lipid transfer protein family revealed a special group that is involved in fiber elongation // Frontiers in Plant Science. Frontiers Media S.A., 2018. Т. 9. С. 1285.

285. Shelenkov A., Slavokhotova A., Odintsova T. Predicting antimicrobial and other cysteine-rich peptides in 1267 plant transcriptomes // Antibiotics. MDPI AG, 2020. Т. 9, № 2.

286. Moyer T. B., Brechbill A. M., Hicks L. M. Mass Spectrometric Identification of Antimicrobial Peptides from Medicinal Seeds // Molecules. MDPI, 2021. Т. 26, № 23. С. 7304.

287. Utkina L. L. и др. Genes encoding 4-Cys antimicrobial peptides in wheat Triticum kiharae Dorof. et Migush.: Multimodular structural organization, instraspecific variability, distribution and role in defence // FEBS Journal. John Wiley & Sons, Ltd, 2013. Т. 280, № 15. С. 35943608.

288. Slavokhotova A. A. и др. Novel antifungal a-hairpinin peptide from Stellaria media seeds: Structure, biosynthesis, gene structure and evolution // Plant Molecular Biology. Plant Mol Biol, 2014. Т. 84, № 1-2. С. 189-202.

289. Odintsova T. I. и др. Seed defensins of barnyard grass Echinochloa crusgalli (L.) Beauv. // Biochimie. Elsevier Masson SAS, 2008. Т. 90, № 11-12. С. 1667-1673.

290. Slavokhotova A. A. и др. Isolation, molecular cloning and antimicrobial activity of novel defensins from common chickweed (Stellaria media L.) seeds // Biochimie. Elsevier Masson SAS, 2011. Т. 93, № 3. С. 450-456.

291. Slezina M. P., Istomina E. A., Odintsova T. I. Thionins of wheat Triticum kiharae Dorof. Et Migush. Are novel potent inhibitors of Candida albicans (C.P. Robin) berkhout // Sel'skokhozyaistvennaya Biologiya. 2019. Т. 54, № 1. С. 169-177.

292. Astafieva A. A. u gp. Discovery of novel antimicrobial peptides with unusual cysteine motifs in dandelion Taraxacum officinale Wigg. flowers // Peptides. Elsevier Inc., 2012. T. 36, № 2. C. 266-271.

293. Astafieva A. A. u gp. A novel cysteine-rich antifungal peptide ToAMP4 from Taraxacum officinale Wigg. flowers // Plant Physiology and Biochemistry. 2013. T. 70. C. 93-99.

294. Astafieva A. A. u gp. Novel proline-hydroxyproline glycopeptides from the dandelion (Taraxacum officinale Wigg.) flowers: De novo sequencing and biological activity // Plant Science. 2015. T. 238. C. 323-329.

295. £akir B., Gulseren i. Identification of Novel Proteins from Black Cumin Seed Meals Based on 2D Gel Electrophoresis and MALDI-TOF/TOF-MS Analysis // Plant Foods for Human Nutrition. Springer New York LLC, 2019. T. 74, № 3. C. 414-420.

296. Beliaev D. u gp. NsD3, a Defensin from Nigella sativa, Confers High Resistance of Several Commercial Potato Varieties to Fungi and Bacteria // in Vitro Cellular \& Developmental Biology-Animal. 2020. T. 56, № 1, S. C. S46.

297. Schaller G., Urech K., Giannattasio M. Cytotoxicity of different viscotoxins and extracts from the European subspecies of Viscum album L. // Phytotherapy Research. 1996. T. 10, № 6. C. 473-477.

298. Orru S. u gp. Amino acid sequence, S-S bridge arrangement and distribution in plant tissues of thionins from Viscum album // Biological Chemistry. 1997. T. 378, № 9. C. 989-996.

299. Boonpa K. u gp. In silico analyses of rice thionin genes and the antimicrobial activity of osthion15 against phytopathogens // Phytopathology. American Phytopathological Society, 2019. T. 109, № 1. C. 27-35.

300. Yan M. u gp. Genome-Wide Identification and Expression Analysis of Thionin Family in Rice (Oryza sativa) and Functional Characterization of OsTHION15 in Drought Stress and ABA Stress // International Journal of Molecular Sciences. Multidisciplinary Digital Publishing Institute (MDPI), 2025. T. 26, № 7. C. 3447.

301. Kishi-Kaboshi M. u gp. A rice fungal MAMP-responsive MAPK cascade regulates metabolic flow to antimicrobial metabolite synthesis // Plant Journal. Plant J, 2010. T. 63, № 4. C. 599-612.

302. Offor B. C., Dubery I. A., Piater L. A. Prospects of gene knockouts in the functional study of mamp-triggered immunity: A review // International Journal of Molecular Sciences. MDPI AG, 2020. T. 21, № 7.

303. Bohlmann H. u gp. Leaf-specific thionins of barley-a novel class of cell wall proteins toxic to plant-pathogenic fungi and possibly involved in the defence mechanism of plants // The EMBO Journal. Wiley, 1988. T. 7, № 6. C. 1559-1565.

304. Rodriguez-Palenzuela P. h gp. Nucleotide sequence and endosperm-specific expression of the structural gene for the toxin a-hordothionin in barley (Hordeum vulgare L.) // Gene. Elsevier, 1988. T. 70, № 2. C. 271-281.

305. Yang X. h gp. Isolation and characterization of a novel thermostable non-specific lipid transfer protein-like antimicrobial protein from motherwort (Leonurus japonicus Houtt) seeds // Peptides. Elsevier, 2006. T. 27, № 12. C. 3122-3128.

306. Souza A. A. h gp. Lipid transfer protein isolated from noni seeds displays antibacterial activity in vitro and improves survival in lethal sepsis induced by CLP in mice // Biochimie. Elsevier B.V., 2018. T. 149. C. 9-17.

307. Bogdanov I. V. h gp. A novel lipid transfer protein from the pea Pisum sativum: Isolation, recombinant expression, solution structure, antifungal activity, lipid binding, and allergenic roperties // BMC Plant Biology. BMC Plant Biology, 2016. T. 16:107.

308. Portz D., Koch E., Slusarenko A. J. Effects of garlic (Allium sativum) juice containing allicin on Phytophthora infestans and downy mildew of cucumber caused by Pseudoperonospora cubensis // European Journal of Plant Pathology. Springer, 2008. T. 122, № 1. C. 197-206.

309. Rogozhin E. A. h gp. Peptide extracts from seven medicinal plants discovered to inhibit oomycete phytophthora infestans, a causative agent of potato late blight disease // Plants. 2020. T. 9, № 10. C. 1-15.

310. Wang X. h gp. Purification and Characterization of Three Antifungal Proteins from Cheeseweed (Malva parviflora) // Biochemical and Biophysical Research Communications. Academic Press, 2001. T. 282, № 5. C. 1224-1228.

311. Okada T., Yoshizumi H. A Lethal Toxic Substance for Brewing Yeast in Wheat and Barley: Part II. Isolation and Some Properties of Toxic Principle // Agricultural and Biological Chemistry. 1970. T. 34, № 7. C. 1089-1094.

312. Okada T., Yoshizumi H., Terashima Y. A Lethal Toxic Substance for Brewing Yeast in Wheat and Barley: Part I. Assay of Toxicity on Various Grains, and Sensitivity Of Various Yeast Strains // Agricultural and Biological Chemistry. 1970. T. 34, № 7. C. 1084-1088.

313. Giudici A. M. h gp. Mistletoe viscotoxins induce membrane permeabilization and spore death in phytopathogenic fungi // Physiologia Plantarum. Physiol Plant, 2004. T. 121, № 1. C. 2-7.

314. Perrone G., Gallo A. Aspergillus species and their associated mycotoxins // Methods in Molecular Biology. Humana Press Inc., 2017. T. 1542. C. 33-49.

315. Cadena J., Thompson G. R., Patterson T. F. Aspergillosis: Epidemiology, Diagnosis, and Treatment // Infectious Disease Clinics of North America. W.B. Saunders, 2021. T. 35, № 2. C. 415-434.

316. Schwarz P., Djenontin E., Dannaoui E. Colistin and Isavuconazole Interact Synergistically In Vitro against Aspergillus nidulans and Aspergillus niger // Microorganisms 2020, Vol. 8, Page 1447. Multidisciplinary Digital Publishing Institute, 2020. T. 8, № 9. C. 1447.

317. Yang X. u gp. A 20-Year Antifungal Susceptibility Surveillance (From 1999 to 2019) for Aspergillus spp. and Proposed Epidemiological Cutoff Values for Aspergillus fumigatus and Aspergillus flavus: A Study in a Tertiary Hospital in China // Frontiers in Microbiology. Frontiers Media S.A., 2021. T. 12. C. 680884.

318. Li Z. u gp. Antifungal Activity of NP20 Derived from Amphioxus Midkine/Pleiotrophin Homolog Against Aspergillus niger and Aspergillus fumigatus // Marine Biotechnology. Springer, 2022. T. 24, № 3. C. 614-625.

319. Vahedi Shahandashti R., Lass-Flörl C. Antifungal resistance in Aspergillus terreus: A current scenario // Fungal Genetics and Biology. Elsevier, 2019. T. 131, № June. C. 103247.

320. Büssing A. u gp. Accidental cell death and generation of reactive oxygen intermediates in human lymphocytes induced by thionins from Viscum album L. // European Journal of Biochemistry. John Wiley & Sons, Ltd, 1999. T. 262, № 1. C. 79-87.

321. Oard S. V. Deciphering a mechanism of membrane permeabilization by a-hordothionin peptide // Biochimica et Biophysica Acta - Biomembranes. Elsevier B.V., 2011. T. 1808, № 6. C. 1737-1745.

322. Lupetti A. u gp. Molecular basis of resistance to azole antifungals // Trends in Molecular Medicine. Elsevier Ltd, 2002. T. 8, № 2. C. 76-81.

323. Selmecki A. u gp. An isochromosome confers drug resistance in vivo by amplification of two genes, ERG11 and TAC1 // Molecular microbiology. Mol Microbiol, 2008. T. 68, № 3. C. 624-641.

324. Cowen L. E. u gp. Genetic Architecture of Hsp90-Dependent Drug Resistance // Eukaryotic Cell. 2006. T. 5, № 12. C. 2184.

325. Sagatova A. A. u gp. Triazole resistance mediated by mutations of a conserved active site tyrosine in fungal lanosterol 14a-demethylase // Scientific reports. Sci Rep, 2016. T. 6.

326. Mishra N. N. u gp. Membrane fluidity and lipid composition of fluconazole resistant and susceptible strains of Candida albicans isolated from diabetic patients // Brazilian Journal of Microbiology. 2008. T. 39, № 2. C. 219.

327. Thevissen K., Terras F. R. G., Broekaert W. F. Permeabilization of fungal membranes by plant defensins inhibits fungal growth // Applied and Environmental Microbiology. 1999. T. 65, № 12. C. 5451-5458.

328. Evett G. E., Donaldson D. M., Vernon L. P. Biological properties of Pyrularia thionin prepared from nuts of Pyrularia pubera // Toxicon. Pergamon, 1986. T. 24, № 6. C. 622-625.

329. Carrasco L. u gp. Thionins: Plant Peptides that Modify Membrane Permeability in Cultured Mammalian Cells // European Journal of Biochemistry. 1981. T. 116, № 1. C. 185-189.

330. Johansson S. u gp. Small, novel proteins from the mistletoe Phoradendron tomentosum exhibit highly selective cytotoxicity to human breast cancer cells // Cellular and Molecular Life Sciences. Springer, 2003. T. 60, № 1. C. 165-175.

331. Rosinski J. A., Atchley W. R. Molecular evolution of helix-turn-helix proteins // Journal of Molecular Evolution. Springer New York, 1999. T. 49, № 3. C. 301-309.

332. Oita S. Degradation of the antimicrobial peptide alpha-thionin by Aspergillus proteases // JOURNAL OF THE BREWING SOCIETY OF JAPAN. 2000. T. 95, № 10. C. 776-779.

333. Vasilchenko A. S. u gp. Studying of cellular interaction of hairpin-like peptide EcAMP1 from barnyard grass (Echinochloa crusgalli L.) seeds with plant pathogenic fungus Fusarium solani using microscopy techniques // Scanning. 2016. T. 38, № 6. C. 591-598.

334. Prosser J. I., Tough A. J. Growth mechanisms and growth kinetics of filamentous microorganisms // Critical Reviews in Biotechnology. 1991. T. 10, № 4. C. 253-274.

335. Meletiadis J. u gp. Analysis of Growth Characteristics of Filamentous Fungi in Different Nutrient Media // Journal of Clinical Microbiology. 2001. T. 39, № 2. C. 478.

336. Meletiadis J., Te Dorsthorst D. T. A., Verweij P. E. Use of turbidimetric growth curves for early determination of antifungal drug resistance of filamentous fungi // Journal of Clinical Microbiology. 2003. T. 41, № 10. C. 4718-4725.

337. Trinci A. P. J. A study of the kinetics of hyphal extension and branch initiation of fungal mycelia // Journal of General Microbiology. Microbiology Society, 1974. T. 81, № 1. C. 225236.

338. Momany M. Polarity in filamentous fungi: Establishment, maintenance and new axes // Current Opinion in Microbiology. Elsevier Ltd, 2002. T. 5, № 6. C. 580-585.

339. van Leeuwen M. R. u gp. Germination of conidia of Aspergillus niger is accompanied by major changes in RNA profiles // Studies in Mycology. Centraalbureau voor Schimmelculturen, 2012. T. 74, № 1. C. 59.

340. Baltussen T. J. H. u gp. Molecular Mechanisms of Conidial Germination in Aspergillus spp. // Microbiology and Molecular Biology Reviews. American Society for Microbiology, 2019. T. 84, № 1.

341. Alvarez F. J., Douglas L. M., Konopka J. B. Sterol-Rich Plasma Membrane Domains in Fungi // Eukaryotic Cell. American Society for Microbiology, 2007. Т. 6, № 5. С. 755-763.

342. Van Leeuwen M. R. и др. Filipin is a reliable in situ marker of ergosterol in the plasma membrane of germinating conidia (spores) of Penicillium discolor and stains intensively at the site of germ tube formation // Journal of Microbiological Methods. Elsevier, 2008. Т. 74, № 2-3. С. 64-73.

343. Ijadpanahsaravi M., Teertstra W. R., Wösten H. A. B. Inter- and intra-species heterogeneity in germination of Aspergillus conidia // Antonie van Leeuwenhoek, International Journal of General and Molecular Microbiology. Springer Science and Business Media Deutschland GmbH, 2022. Т. 115, № 9. С. 1151-1164.

344. Hamill P. G. и др. Microbial lag phase can be indicative of, or independent from, cellular stress // Scientific Reports. Springer US, 2020. Т. 10, № 1. С. 1-20.

345. Osorio e Castro V. R., Van Kuiken B. A., Vernon L. P. Action of a thionin isolated from nuts of Pyrularia pubera on human erythrocytes // Toxicon. 1989. Т. 27, № 5. С. 501-510.

346. Михайлов В. Ф. и др. Сравнительный анализ природных и синтетических антимутагенов как регуляторов экспрессии генов в клетках человека при воздействии ионизирующего облучения // Генетика. 2015. Т. 51, № 2. С. 147-155.

347. Morein S. и др. Wild-type Escherichia coli Cells Regulate the Membrane Lipid Composition in a "Window" between Gel and Non-lamellar Structures // Journal of Biological Chemistry. Elsevier, 1996. Т. 271, № 12. С. 6801-6809.

348. Rog T. и др. Ordering effects of cholesterol and its analogues // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes. Elsevier, 2009. Т. 1788, № 1. С. 97-121.

349. Choy H. L., Gaylord E. A., Doering T. L. Ergosterol distribution controls surface structure formation and fungal pathogenicity // mBio. NLM (Medline), 2023. Т. 14, № 4. С. e0135323.

350. Ефимова С. С. и др. Зависимость каналообразубщей способности лантибиотиков от липидного состава мембран // Биологические мембраны. 2022. Т. 39, № 2. С. 138-145.

351. Mason A. J., Marquette A., Bechinger B. Zwitterionic phospholipids and sterols modulate antimicrobial peptide-induced membrane destabilization // Biophysical Journal. Biophysical Society, 2007. Т. 93, № 12. С. 4289-4299.

352. Vila-Perello M. и др. Structural dissection of a highly knotted peptide reveals minimal motif with antimicrobial activity // Journal of Biological Chemistry. Elsevier, 2005. Т. 280, № 2. С. 1661-1668.

353. Paramonov A. S. и др. Spatial structure and oligomerization of viscotoxin A3 in detergent micelles: Implication for mechanisms of ion channel formation and membrane lysis //

Biochemical and Biophysical Research Communications. Elsevier B.V., 2021. Т. 585. С. 2228.

354. Florack D. E. A., Stiekema W. J. Thionins: properties, possible biological roles and mechanisms of action // Plant Molecular Biology. Kluwer Academic Publishers, 1994. Т. 26, № 1. С. 25-37.

355. Steiner H. и др. Sequence and specificity of two antibacterial proteins involved in insect immunity // Nature. Nature, 1981. Т. 292, № 5820. С. 246-248.

356. Ziaja M. и др. Cecropins in cancer therapies-where we have been? // European Journal of Pharmacology. Elsevier, 2020. Т. 882. С. 173317.

357. Chen H. M. и др. Effects of the anti-bacterial peptide cecropin B and its analogs, cecropins B-1 and B-2, on liposomes, bacteria, and cancer cells // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - General Subjects. Elsevier, 1997. Т. 1336, № 2. С. 171-179.

358. Nevalainen K. M. H., Te'o V. S. J., Bergquist P. L. Heterologous protein expression in filamentous fungi // Trends in Biotechnology. Elsevier, 2005. Т. 23, № 9. С. 468-474.

359. Gazzaneo L. R. S. и др. Heterologous Expression Systems for Plant Defensin Expression: Examples of Success and Pitfalls // Current Protein & Peptide Science. Bentham Science Publishers Ltd., 2017. Т. 18, № 4. С. 391-399.

360. Bogomolovas J. и др. Screening of fusion partners for high yield expression and purification of bioactive viscotoxins // Protein Expression and Purification. Elsevier Inc., 2009. Т. 64, № 1. С. 16-23.

361. Барашкова А. С. и др. КОМПОЗИЦИЯ НА ОСНОВЕ ГИБРИДНОГО РЕКОМБИНАНТНОГО ПОЛИПЕПТИДА ДЛЯ ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ ОТ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ ООМИЦЕТАМИ: пат. ИЗ №2786706 USA. 2022.

362. Истомина Е. А. и др. Гены гевеиноподобных антимикробных пептидов семейства WAMP у видов рода Aegilops L. // Генетика. 2017. Т. 53, № 12. С. 1402-1410.

363. He Y. H. и др. RALF22 promotes plant immunity and amplifies the Pep3 immune signal // Journal of Integrative Plant Biology. John Wiley and Sons Inc, 2023. Т. 65, № 11. С. 25192534.

364. Barashkova A. S. и др. Nigellothionins from Black Cumin (Nigella sativa L.) Seeds Demonstrate Strong Antifungal and Cytotoxic Activity // Antibiotics. 2021. Т. 10, № 2. С. 166.

365. Gessler N. N., Egorova A. S., Belozerskaya T. A. Melanin pigments of fungi under extreme environmental conditions (Review) // Applied Biochemistry and Microbiology. 2014. Т. 50, № 2. С. 105-113.

366. Krijgsheld P. и др. Development in aspergillus // Studies in Mycology. Centraalbureau voor Schimmelculturen, 2013. Т. 74. С. 1-29.

367. Marshall' M. A., Timberlake' W. E. Aspergillus nidulans wetA activates spore-specific gene expression. // Molecular and Cellular Biology. American Society for Microbiology (ASM), 1991. Т. 11, № 1. С. 55.

368. Гесслер Н. Н., Аверьянов А. А., Белозерская Т. А. Активные формы кислорода в регуляции развития грибов // Биохимия. 2007. Т. 72, № 10. С. 1342-1364.

369. Muri J., Kopf M. The thioredoxin system: Balancing redox responses in immune cells and tumors // European Journal of Immunology. John Wiley & Sons, Ltd, 2023. Т. 53, № 1. С. 2249948.

370. Shang W. и др. Increased Thioredoxin-1 Expression Promotes Cancer Progression and Predicts Poor Prognosis in Patients with Gastric Cancer // Oxidative Medicine and Cellular Longevity. John Wiley & Sons, Ltd, 2019. Т. 2019, № 1. С. 9291683.

371. Bhatia M. и др. The thioredoxin system in breast cancer cell invasion and migration // Redox Biology. Elsevier, 2016. Т. 8. С. 68-78.

372. Nakamura H., Masutani H., Yodoi J. Extracellular thioredoxin and thioredoxin-binding protein 2 in control of cancer // Seminars in Cancer Biology. Academic Press, 2006. Т. 16, № 6. С. 444-451.