Влияние модификаторов подвижных фаз на разделение аминокислот методом ТСХ на силикагеле тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.02, кандидат химических наук Ворожейкин, Сергей Борисович

• Ворожейкин, Сергей Борисович
• кандидат химических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат химических наук Ворожейкин, Сергей Борисович

1. Обзор литературы.9

1.1 Краткая характеристика методов хроматографического

разделения и определения аминокислот.9

1.2. Детектирование пятен и возможности улучшения селективности, разделения веществ в ТСХ.16

1.2.1. Детектирование аминокислот.21

1.3. Сравнение методов ТСХ и ВЭТСХ.26

1.4. Характеристика элюентов, применяемых в ТСХ.29

1.4.1. Классификация ПФ.30

1.5. Технические приёмы, используемые в ТСХ аминокислот.35

1.5.1. Применение силикагеля в ТСХ аминокислот.35

1.5.2 Роль модификаторов в водно-органических подвижных фазах.37

1.5.3. Модификаторы на основе мицеллярных ПАВ.40

2. Методика и техника проведения эксперимента.43

2.1. Реактивы и аппаратура.43

2.2 Техника и методика проведения эксперимента.

2.3. Расчет параметров эффективности и селективности разделения. Полуколичественный анализ.47

2.4. Полуколичественный анализ препаратов, содержащих аминокислоты.

3. Результаты и их обсуждение. 50

3.1 Хроматографическое поведение аминокислот в системе модификатор : этанол : ледяная уксусная кислота : вода.50

3.2. Хроматографическое поведение аминокислот в системе модификатор : ДМФА : ледяная уксусная кислота : вода.64

3.3 Хроматографическое поведение аминокислот в мицеллярных подвижных фазах.81

3.3.1. Влияние анионного ПАВ - ДДС.81

3.3.2. Влияние катионного ПАВ - ЦПХ.91

3.3.3. Влияние неионного ПАВ - ТРИТОНА Х-100.96

4. Практическое применение ТСХ в мицеллярных и водно-органических подвижных фазах. 104

4.1. Методика подготовки объекта к хроматографированию.

4.2. Результаты количественного определения аминокислот в исследуемых объектах.106

4.3. Статистическая обработка полученных результатов.118

Выводы.123

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние модификаторов подвижных фаз на разделение аминокислот методом ТСХ на силикагеле»

Важная биохимическая роль и широкое применение аминокислот в фармацевтике, медицине, биотехнологии, пищевой промышленности, спортивной практике, широкий ассортимент выпускаемых на их основе коммерческих продуктов достаточно стандартного состава требуют разработки простых методов разделения, идентификации и количественного определения аминокислот в различных смесях. Одним из таких методов является тонкослойная хроматография. Несмотря на принадлежность к одному классу химических соединений, признаком которого является присутствие в молекулах а-аминокислот одних и тех же функциональных групп, их химические и сорбционные свойства, вследствие различной природы и структуры основной части углеводородного остова молекулы, могут существенно различаться. В связи с этим аминокислоты подразделяют на несколько родственных групп.

Наиболее известна классификация, основанная на общей полярности молекулы, по которой аминокислоты делят на 4 группы: гидрофобные (неполярные), полярные, но незаряженные, полярные отрицательно заряженные и полярные положительно заряженные при рН 6-7 аминокислоты. Такое разнообразие свойств аминокислот предполагает возможность регулирования эффективности и селективности их разделения с помощью различных по природе подвижных фаз (ПФ). Разделению аминокислот методом ТСХ посвящено большое количество публикаций, однако полной предсказуемости влияния природы различных модификаторов ПФ, в том числе мицеллярных подвижных фаз, до сих пор не имеется.

Цель работы состояла в оценке влияния природы модификаторов водно-органических и водных подвижных фаз на хроматографическое разделение различных групп аминокислот методом ТСХ на силикагеле.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи: изучить влияние природы и концентрации гидрофобных нелокализующихся (дихлор-, трихлор-, тетрахлорметана) и локализующихся протонных (этанол) и апротонных (диметилформамид) модификаторов ПФ, на подвижность и разделение аминокислот на силикагеле;

- изучить влияние природы и концентрации поверхностно-активных веществ (ПАВ) различных типов (катионные, анионные и неионные) на подвижность аминокислот в водных ПФ;

- рассчитать количественные характеристики, характеризующие эффективность хроматографического разделения и разрешение хроматографических зон для всех исследованных подвижных фаз и сорбатов;

- выявить зависимость подвижности аминокислот от рН среды и ионной силы в мицеллярных подвижных фазах;

- оценить возможность практического применения изученных систем для разделения и определения аминокислот в реальных объектах.

Научная новизна работы:

- выявлены зависимости, характеризующие влияние концентрации и природы нелокализующихся хлоруглеводородных модификаторов, а также локализующихся модификаторов (этанола и диметилформамида) водно-органических ПФ на подвижность и хроматографическое разделение 17 аминокислот различных групп методом ТСХ на силикагеле;

- установлены зависимости, характеризующие влияние концентрации и природы мицелл ПАВ в водной ПФ на подвижность и хроматографическое разделение различных групп аминокислот методом ТСХ на силикагеле; рассчитаны параметры, характеризующие эффективность и селективность хроматографического разделения аминокислот методом ТСХ на силикагеле в водно-органических и мицеллярных водных ПФ; найдены оптимальные условия разделения аминокислот, принадлежащих разным группам, в водно-органических и водных ПФ на основе динамических модификаторов и показана возможность применения в ТСХ всех видов ПФ для разделения и определения аминокислот.

Практическая значимость работы. Полученные результаты позволяют расширить возможности метода ТСХ на силикагеле при разделении аминокислот, используя для динамической модификации водно-органических ПФ локализующиеся и нелокализующиеся растворители различной природы, и ПАВ для водных ПФ.

Предложены методики разделения и полуколичественного определения аминокислот в трех коммерческих препаратах биологически-активных добавок «Фактор роста», «ВСАА» и «Элтацин».

На защиту выносятся;

- зависимости подвижности аминокислот от концентрации и природы модификаторов в водно-органических подвижных фазах, параметры эффективности и селективности их разделения на силикагеле;

- результаты влияния природы и концентрации ПАВ как модификаторов водных ПФ, кислотности среды и ионной силы раствора на подвижность аминокислот, параметры эффективности и селективности их хроматографирования в мицеллярных подвижных фазах;

- результаты применения водно-органических и мицеллярных ПФ для тестирования и количественного определения аминокислот в реальных объектах.

Личный вклад автора заключается в экспериментальном исследовании хроматографического поведения аминокислот в водно-органических и водных мицеллярных ПФ, выявлении концентрационных и других зависимостей их подвижностей, расчете параметров эффективности и селективности разделения, обработке, оформлении, обсуждении полученных результатов, подготовке публикаций, выявлении направлений их практического применения.

Апробация работы. Основные результаты работы изложены на V Международной научной конференции «Проблемы сохранения и рационального использования биоразнообразия Прикаспия и сопредельных регионов» (Элиста, 2006), VI-VIII Всероссийских конференциях молодых ученых "Современные проблемы теоретической и экспериментальной химии" (Саратов 2007, 2010, 2011), Всероссийской конференции «Аналитическая хроматография и капиллярный электрофорез» (Краснодар, 2010), I Всероссийском симпозиуме с международным участием по поверхностно-активным веществам «От коллоидных систем к нанохимии» (Казань, 2011).

Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 8 работ в виде 1 статьи в журнале ВАК, 5 статей в сборниках и 2 тезисов докладов на Международных и Всероссийских конференциях.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 170 страницах машинописного текста, включая введение, 4 главы, выводы, список цитируемой литературы, содержащий 138 источников и приложение. В работе содержится 45 таблиц и 61 рисунок.

Заключение диссертации по теме «Аналитическая химия», Ворожейкин, Сергей Борисович

ВЫВОДЫ:

1. Изучено влияние нелокализующихся ди-, три- и тетрахлорметана и локализующихся протонодонорного (этанол) и протоноакцепторного (диметилформамид) растворителей на хроматографическую подвижность 17 аминокислот, относящихся к полярным, неполярным и гидрофобным группам. Показано, что на их подвижность влияет полярность по Снайдеру четырехкомпонентной системы растворителей, образующей ПФ; чем она больше в ряду СНС1з>СН2С12>СС14, тем меньше аминокислот, т.е. тем сильнее они удерживаются неподвижной фазой. Эта тенденция сильнее выражена для ПФ, содержащей в качестве второго модификатора этанол. Уменьшение концентрации хлорсодержащего модификатора, также увеличивающего полярность ПФ, увеличивает подвижность аминокислот за счет усиления межмолекулярных взаимодействий между полярными компонентами ПФ и аминокислотами.

2. Получены уравнения количественных зависимостей подвижности от концентрации ди-, три- и тетрахлорметана в ПФ, содержащих этанол и ДМФА, рассчитаны параметры эффективности и селективности хроматографического процесса для каждого вида водно-органических ПФ. Показано, что замена протонодонорного этанола на апротонный ДМФА позволяет расширить возможности ПФ и улучшить эффективность хроматографического процесса. Сделан вывод, что системы с этанолом и ДМФА дополняют друг друга и позволяют подобрать оптимальную ПФ для каждого конкретного объекта, содержащего те или иные группы аминокислот.

3. Изучено влияние природы и концентрации поверхностно-активных веществ как модификаторов подвижной фазы на разделение аминокислот на силикагеле. Показано, что модификация водной ПФ анионными (ДДС) и катионными (ЦПХ) ПАВ позволяют хорошо разделять гидрофильные аминокислоты при концентрации ПАВ в 2 раза превышающей критическую концентрацию их мицеллообразования, что согласуются с тенденциями мицеллярной ТСХ. В ПФ на основе 0,005 М ТХ-100 возможно разделение трех гидрофильных аминокислот. Гидрофобные и незаряженные аминокислоты разделяются во всех трех видах МПФ частично. Рост концентрации ПАВ в МПФ в большинстве случаев увеличивает число теоретических тарелок и уменьшает ВЭТТ. Впервые показано, что варьирование ионной силы раствора и pH среды позволяет дополнительно влиять на подвижность, эффективность и селективность разделения в МПФ.

4. С использованием полученных результатов проанализированы 3 коммерческих препарата биологически-активных добавок «Фактор роста», «ВСАА» и «Элтацин», содержащие аминокислоты. Установлено, что как водно-органические, так и мицеллярные ПФ позволяют тестировать указанные препараты на присутствие аминокислот и количественно определять эти аминокислоты методом ТСХ с применением денситометрических измерений интенсивности окрашенных зон. Показано, что содержание аминокислот в препаратах в целом соответствует заявленному в паспорте.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Ворожейкин, Сергей Борисович, 2012 год

1. Дегтерев Е.В., Тяглов Б.В., Красиков В.Д., Малахова И.И., Гаевский А.В. Применение тонкослойной хроматографии в анализе биологически активных веществ / В кн. 100 лет хроматографии. М. Наука, 2003. С.233-268.

2. Остерман Л.А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. М.: Наука, 1985. 535 с.

3. Якубке Х.-Д., Ешкайт X. Аминокислоты, пептиды, белки. М.: Мир, 1985.456 с.

4. Дэвени Т., Гергей Я. Аминокислоты, пептиды и белки. М.: Мир, 1976. 368 с.

5. Витт С.В., Сапоровская М.Б., Аввакумов Г.В., Беликов В.М. Современное состояние газохроматографического анализа аминокислот // Успехи химии. 1976. Т.45. С. 548-574.

6. Bhushan R., Martens J. Aminoacids and their derivatives / In: Sherma J., Fried В (eds) Handbook of thin layer chromatography. Second Ed. New York -Basel: Marcel-Dekker. 1996. P.389-425.

7. Molnar-Perl I. Quantitation of amino acids and amines in the same matrix by high-performance liquid chromatography, either simultaneously or separately. // J. Chromatogr. A. 2003. V. 987. №1-2. P. 291-309.

8. Краснова И.Н., Карцова Jl.A., Черкас Ю.В. Определение аминокислот в сыворотке крови человека методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии в режиме изократического элюирования. // Журн. аналит. химии. 2000. Т. 55. № 1.С. 66-74.

9. Starke I., Kleinpeter Е., Kamm В. Separation, identification, and quantification of amino acids in 1-lysine fermentation potato juices by gas chromatography-mass spectrometry. //Fresenius J. Anal. Chem. 2001. V.371. P. 380-384.

10. Манаенков O.B., Сидоров А.И., Сульман Э.М. Экспресс-определение аминокислот методом капиллярного электрофореза без их предварительной дериватизации. // Журн. анал. хим. 2003. Т. 58. №10. С. 1093-1096.

11. Yang L.-L., Zhang De.-Q., Yuan Z.-B. Enantioseparation of o-phthaldiadehyde derivatized amino acids using (3-CD-modified micellar electrokinetic chromatography in the mixed aqueous-organic media. // Anal. Chim. Acta. 2001. V. 433. P. 23-30.

12. Zoppa M., Gallo L., Zacchello F., Giordano G. Method for the quantification of underivatized amino acids on dry blood spots from newborn screening by HPLC-ESI-MS/MS. //J. Chromatogr. B. 2006. V. 831. 1.1-2. P. 267273.

13. Селеменев В.Ф. Обменные процессы и межмолекулярные взаимодействия в системе ионит-вода-аминокислота. Дис. докт. хим. наук. Воронеж. ВГУ. 1993. 603 с.

14. Котова Д.Л. Структурно-обусловленные межчастичные взаимодействия при сорбции аминокислот на сшитом катионообменнике. Автореф дис. докт. хим. наук. Воронеж. ВГУ. 2004. 40 с.

15. Хохлов В.Ю. Сорбция ароматических и гетероциклических аминокислот высокоосновными анионообменниками в многокомпонентных системах. Автореф дис. докт. хим. наук. Воронеж. ВГУ. 2008. 38 с.

16. Селеменев В.Ф., Хохлов В.Ю., Бобрешова О.В., Аристов И.В., Котова Д.Л. Физико-химические основы сорбционных и мембранных методов выделения и разделения аминокислот. М.: Стелайт. 2002. 300 с.

17. Селеменев В.Ф. Меланоидины. Воронеж: Воронеж, гос. ун-т. 2004.195 с.

18. Рудаков О.Б., Селеменев В.Ф. Физико-химические системы сорбат-сорбент-элюент в жидкостной хроматографии, Воронеж. 2003. 240 с.

19. High-Performance Capillary Electrophoresis: Theory, Techniques and Applications./ Ed. Khaledi M.G. New York, USA: J. Wiley & Sons 1998. 1047 p.

20. El Rassi Z. and Giese R.W. Selectivity and Optimization in Capillary Electrophoresis. Amsterdam, The Netherlands: Elsevier, 1997, 530 p.

21. Шпак A.B., Пирогов A.B., Шпигун O.A. Определение аминокислот методом капиллярного электрофореза без предварительной дериватизации // Журн. анал. хим. 2003. Т.58. №7. С. 729.

22. Мосина А.Г., Мельников И.О. Капиллярный электрофорез немодифицированных генетически кодируемых аминокислот // Журн. аналит. хим. 2009. Т.64. №6. С. 655-659

23. Melnikov I.O., Nazimov I.V., Lobazov A.F., Popkovich G.B. Capillary Electrophoresis of Coded Nonmodified Amino Acids With Refractometric Detection. // 3rd Intern. Symp. on Separ. in Biosci., Москва, май 2003, P. 263.

24. Paez X., Rada P., Hernandez L. Neutral amino acids monitoring in phenylketonuric plasma microdialysates using micellar electrokinetic chromatography and laser-induced fluorescence detection. // J. Chromatogr. B. -2000. V. 739. P. 247-254.

25. Thorsen G., Bergquist J. Chiral separation of amino acids in biological fluids by micellar electrokinetic chromatography with laser-induced fluorescence detection. // J. Chromatogr. B. 2000. V. 745. P. 389-397.

26. Lummerhofer M., Lindner W. High-efficiency chiral separations of N-derivatized amino acids by packed-capillary electrochromatography with a quinine-based chiral anion-exchange type stationary phase. // J. Chromatogr. A. -1998. V. 829. P. 115-125.

27. Qi M., Li X-F, Stathakis C., Dovichi N.J. Capillary electrochromatography with thermo-optical absorbance detection for the analysis of phenylthiohydantoin- amino acids. //J. Chromatogr. A. 1999. V. 853. P. 131140.

28. Бёккер Ю. Хроматография. Инструментальная аналитика: методы хроматографии и капиллярного электрофореза, / Под ред. А.А. Курганова. М.: Техносфера, 2009. 470 с.

29. Xu J.-J, Peng Y., Bao N., Xia Х.-Н., Chen H.-Y. Simple method for the separation and detection of native amino acids and the identification of electroactive and non-electroactive analytes. // J. Chromatogr. A. 2005. V. 1095. P. 193-196.

30. Klampfl C.W. Recent advances in the application of capillary electrophoresis with mass spectrometric detection. // Electrophoresis. 2006. V. 27. P. 3-34.

31. Лебедев А.Т. Масс-спектрометрия в органической химии. М.: БИНОМ. Лаборатория знаний. 2003. 493 с.

32. Гиошон Ж., Гийемен К. Количественная газовая хроматография: для лабораторных анализов и промышленного контроля. В 2-х томах М.: Мир, 1991. Т.1 582 с.

33. Husek P., Liebich Н.М. Organic and amino acids profiling by direct treatment of deprotenized plasma with ethyl chlorformiate // J. Chromatogr. 1994.V. 656. P. 37-43.

34. Husek P. Amino and long-chain fatty acids esterified by action of alkyl chloroformiates and analyzed by capillary gas chromatography // J. Chromatogr. 1993.V. 615. P. 334-338.

35. Husek P. Capillary GC analysis of biogenic amines, their precursors and cataboltes after fast derivatization with ethyl chlorformiate // J. Microcol. Sep. 1993.V. 5. P.101-103.

36. Husek P. Simultananeus profile analysis of plasma amino and organic acids by capillary gas chromatography // J. Chromatogr. 1995.V. 669. P. 352-357.

37. Исии Д. Введение в микромасштабную высокоэффективную жидкостную хроматографию / Под. ред. В.Г. Березкина, М.: Мир, 1991. 240 с.

38. Хеншен А., Хупэ К-П., Лотшпайх Ф. и др., Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии / Под ред. В.Г. Березкина М.: Мир, 1988. 688 с.

39. Metrione R. М. Separation of lissamine rhodamine В sulfonyl derivative of amino acids by high-performance liquid chromatography and thin-layer chromatography J. Chromatogr. 1986. V. 363. № 2. P. 337-344.

40. Schuster R. Determination of amino acids in biological, pharmaceutical, plant and food samples by automated precolumn derivatization and highperformance liquid chromatography // J. Chromatogr. 1988. V. 431. P. 271-284.

41. Frey J., Chamson A, and Raby N. Separation of amino acids using ion-paired reversed-phase high-performance liquid chromatography with special reference to collagen hydrolysate Publisher: Springer Verlag Wien. 1993. V. 4. № 1-2. P. 45-51.

42. Ананьева И. А., Шаповалова E.H., Лопатин С.А. и др. Разделение производных энантиомеров аминокислот на аминированном Ь-циклодекстрине методом высокоэффективной жидкостной хроматографии // Вестник МГУ. «Химия». 2001. Т.42. № 4. С. 273-277.

43. Ананьева И. А., Мышак E.H., Шаповалова E.H., Шпигун O.A. Хроматографическое удерживание и энантиоразделение производных аминокислот на аминированном ß-циклодекстрине как функции гидрофобности сорбатов // Журн. аналит. химии. 2003. №5. С.517-523.

44. Чернобровкин М.Г., Ананьева H.A., Шаповалова E.H., Шпигун O.A. Определение энантиомеров аминокислот в фармацевтических препаратах методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии, Журн. аналит. химии. 2004. №1. С.64-73.

45. Чернобровкин М.Г., Ананьева И.А., Шаповалова E.H., Шпигун O.A. Определение аминокислот в пиве с использованием электрохимического и флуориметрического детектирования // Заводск. лаб. 2003. Т.69. № 10. С.7-11.

46. Чернобровкин М.Г., Кольцова Н.В., Шепелев Б.Н. Определение аминокислот в препарате «Элтацин» // Фармация. 2004. № 5. С. 18-20.

47. Краснова И.Н., Карцова JI.A., Колмакова И.В. Анализ нейромедиаторных аминокислот и биогенных аминов в спинномозговой жидкости методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. // Журн. аналит. химии. 1997. Т. 52. №7. С. 767-772.

48. Molnar-Perl I. Role of chromatography in the analysis of sugars, carboxylic acids and amino acids in food. // J. Chromatogr. A. 2000. V. 891. №1. P. 1-32.

49. Натыкан A.A., Сычева К.Ю., Чернобровкин М.Г., Шаповалова E.H., Шпигун O.A. Хроматографическое определение аминокислот и их оптических изомеров с применением колонки Nautilus-E // Заводск. лаб. Диагностика матер. 2011. Т.77. № 3. С. 18-22.

50. Гейсс Ф. Основы тонкослойной хроматографии (планарная хроматография) / Под ред. В.Г. Березкина М.: Химия, 1999. Т. 1 и 2.

51. Красиков В.Д. Основы планарной хроматографии. СПб.: Химиздат., 2005.232 с.

52. Treiber L. R. Quantitative TLC and its Industrial Application. N. Y.: Marcel Dekker, 1987. 370 p.

53. Jork H., Funk W., Fisher W. Thin-Layer Chromatography. Reagents and Detection Methods. Weinheim, 1990. V. 1. P. 453-464.

54. Metrione R. M. TLC of dansyl amino acids // J. Chromatogr. 1978. V. 154. P. 247-253.

55. Postaire E., Sarbuch C, Regnault C. New method of derivatization by overpressure derivatization system // J. Planar Chromatogr. 1990. V.3. P. 247252.

56. Planar Chromatography 2003. Modern Thin-Layer Chromatography. Camag. Muttenz, 2003.44 p.; Chrom Book 2004. Merck. Darmstadt, 2004. 1871. P

57. Каталог. Оборудование для TCX. НТЦ "Ленхром". Санкт-Петербург, 2007 (http://www.lenchrom.spb.ru).

58. Каталог. Материалы и оборудование для ТСХ. ЗАО "Сорбполимер". Краснодар, 2007 (http://www.sorbfil.com).

59. Вапег К., Gros L., Saurev W. Thin-Layer Chromatography. Merck. Haidelberg: Huthig Buch Verlag, 1991. 166 p.

60. Touchstone J. C. Practice of Thin-Layer Chromatography. N. Y.: J. Wiley and Sons, 1992. 270 p.

61. Хроматография в тонких слоях / Под ред. Э. Шталя. М.: Мир, 1965.508 с

62. Kreuzig F. Derivatization of substances, separated on thin-layer plates, by means of an automatic spraying device // Chromatographia. 1980. V. 13. P. 238-240.

63. Kreuzig F. Application of quantitative high-performance thin-layer chromatography in the antibiotic industry // J. Chromatogr. 1977. V. 142. P. 441447.

64. Degterev E. V., Tyaglov В. V., Malakhova 1.1., Krasikov V. D. Quantitative analysis of L-tryptophan in fermentation broth // J. Planar Chromatogr.-Modern TLC 2000. V. 13. P. 194-199.

65. Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография. /Перевод под ред. В.Г. Березкина. М.: Мир, 1981. Т. 1. С.616

66. Mikes О. Laboratory Handbook of Chromatographic and applied methods, «Ellis Hopwood», New York, 1979, 512 p.

67. Евгеньев М. П., Гармонов С. Ю., Шакирова Jl. Ш., Дегтерев Е. В. Проточно-инжекционное определение лекарственных веществ, содержащих первичные аминные функциональные группы, Хим.-фарм. журн. 2002. Т.36, №10. С.34-39.

68. Seracu D.I. Spectra of ningidrin complexes with 22 amino acids // Anal. Left., 1987. V.20, P.1417-1424

69. Bhushan R. Amino acids and their derivatives, Hand Book of Thin-Layer Chromatography (ed. By J. Sherma and B. Fried), v.55, Chromatographic Sci. Series, New York, 1991. P. 388-389

70. Зенкова Е.А., Дегтерев Е.В. 1,2,3,4-тетрагидро-1,4-диоксо-2,2,3,3-тетрагидроксинафталин (оксолин), как реагент для обнаружения биогенных аминов методом ТСХ и источник получения нингидринного реактива // Хим. фарм. журн. 2000.Т.34. № 2. С.40-48.

71. Зенкова Е.А., Дегтерев Е.В. Оптимизация получения нингидринового реактива и 1,2,3,4-тетрагидро-1,2-диоксо-2,2,3,3-тетрагидроксинафталин (оксолина) и возможности его применения // Хим. фарм. журн. 2000. Т.34. № 3. С.31-33.

72. Шаршунова М., Шварц В., Михалец Ч. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии / Под ред. Березкина В.Г., Соколова С.Д. М.: Мир, 1980. Т. 1. 296 с.

73. Высокоэффективная тонкослойная хроматография / Под ред. А. Златкиса, Р.Е.Кайзера. М.: Мир, 1979. 245 с.

74. Сумина Е.Г., Штыков С.Н., Тюрина Н.В. Тонкослойная хроматография. Теоретические основы и практическое применение. Изд-во СГУ, Саратов, 2002. 105 с.

75. Fenimore D.C., Davis С.М. High performance thin-layer chromatography // Anal. Chem., 1981. V. 2. P. 252-258;

76. Reich E., Schibli A. High-Performance Thin-Layer Chromatography for the Analysis of Medicinal Plants. Thieme: New York Stuttgart. 2006. 264 p.

77. Сакодынский К.И., Бражников В.В., Волков С.А., Зельвенский В.Ю., Ганкина Э.С., Шатц В.Д. Аналитическая хроматография.- М.: Химия, 1993. с.

78. Беленький Б.Г., Волынец М.П., Ганкина Э.С. Современная тонкослойная хроматография // Журн. Всес. хим. о-ва. 1983. Т. 28. № 1 С. 3034.

79. Snyder L.R. Classification of the solvent properties // J. Chromatogr. Sci. 1978. V.16. P.223.

80. Planar Chromatography 2002, Modern Thin-Layer Chromatography. Camag.: Muttenz, 2002. 40 p.

81. Nyiredy Sz., Evdelmeier C. A., Meier B. TLC mobile phase optimization procedure using the "PRIZMA" model // PlantaMed. 1985. P. 241-252.

82. Nidervieser A., Pattaki J., Brenner M. TLC of different aminoacids on silica gel layers // Helv. Chim. Acta. 1961. Vol.44. P.2022-2030.

83. Nidervieser A., Pattaki J. Separation of aminoacids and peptides on silica gel // Anal. Chim. acta. 1969. Vol.14. P.378-390.

84. Chmel K. Thin layer chromatography of 22 aminoacids on silics gel and RP layers // Collect. Czech. Chem. Commun. 1972. Vol.37. P.3612-3621.

85. Varshney K.G., Khan A.A., Maheshwari S.M. and Gupta U. Chromatographic separation of a-amino acids on antimony (V) phosphate-silica gel "G" plates from some synthetic mixtures and drug samples.// Bull. Chem. Soc. Jpn. 1992. V.65. P.2773-2778.

86. Deng Q.Y., Zhang Z., Su J. Y. Thin layer chromatographic separation of amino acid enantiomers using ligand exchange // Chin. Chem. Lett. 1997. V. 8. P. 161-164.

87. Weng J., Qui J., Zheng Y., Fujian S. The separation of D,L-enantiomers of amino acids with thin layer chromatography modified by (3-cyclodextrin // Daxue Xuebao Ziran kexueban. 1996. V. 12. P. 31-35.

88. Bhushan R., Reddy G. P. TLC of amino acids on silica gel impregnated with metal ions // Chromatographia. 1998. V. 25, P. 455-499.

89. Bhushan R. Amino acids and their derivatives. Hand book of Thin layer Chromatography (ed. Sherma J., Fried B.) // J. Chromatogr. Sci. Series. 1991. V. 55. P. 353-387.

90. Bhushan R. Amino acids. Hand book of Thin layer Chromatography (ed. by Sherma J.) / J. Chromatogr. Sci. Series. 1996. V. 60. 990 p.

91. Bhushan R. Some effective solvent systems for rapid resolution of DPH-amino acids by TLC // J. Chromatogr. V. 25, 1998, P.435-456.

92. Bhushan R., Arora M. Resolution of enantiomers of DL amino acids on silica gel plates impregnated with optically pure (-)-quinine // Biomed. Chromatogr. 2001. V. 15. P. 433-436.

93. Bhushan R., Reddy G.P., Joshi S. TLC resolution of DL amino acid on impregnated silica gel plates // J. Planar Chromatogr. Mod. TLC. 1994. V. 7. P. 126-128.

94. Bhushan R., Mahesh V.K., Verma A. Improved thin layer chromatographic resolution of PTH amino acids with some new solvent systems //Biomed. Chromatogr. 1994. V.8. P. 69-72.

95. Sharma S.D., Sharma H., Sharma S.C. Effect of mobile phase composition and pH on thin layer chromatographic behaviour of amino acids // J. Indian Chem. Soc. 2001. V. 78. P. 419-421.

96. Sharma S.D., Sharma H., Sharma S.C. Thin layer chromatography of amino acids on titanium tungstate using dimethyl sulfoxide as the mobile phase // J. Chem. Environ. Res. 2002. V. 11. P. 179-187.

97. Дегтерев E.B., Подгорнова Т.П. Количественное определение L-лейцина и L-изолейцина методом хроматографии в тонком слое сорбента // Хим. фарм. журн. 1978. Т. 12. № 8. С. 133-136.

98. Дегтерев Е.В. Пути совершенствования аналитического контроля производства аминокислот // В сб. трудов ВНИХФИ. М., 1985. С.5-12.

99. Degterev E.V., Degtiar W.G., Tyaglov B.V., Tarasov A.P., Krylov V.M., Malakhova I.I., Krasikov V.D. Quantitive analysis of L-tryptophan in fermentation broth // J. Planar Chromatogr. Modern TLC. 2000. V. 13. № 3. P.191-194.

100. Malakhova I.I., Krasikov V.D., Degterev E.V., Tyaglov B.V. Quantitative determination of industrial aminoacids // J. Planar Chromatogr. Modern TLC. 1996. V. 9. № 5. P.375-378.

101. Randic Z.G. TLC analysis of free amino acids in Valerianae radix its products // Farmaceutski Glasnik. 2004. V. 60. P. 381-391.

102. Randic Z.G., Males Z., Vestermajer G. TLC analysis of free amino acids in Althaeae radix treated with different y-irradiation doses // Farmaceutski Glasnik. 2004. V.60. P. 1-6.

103. Males Z., Plazibat M., Vundac V.B., Zuntar I., Pilepic K.H. Thin layer chromatographic analysis of flavonoids, phenolic acids and amino acids in som Croatian Hypericum taxa // J. Planar Chromatogr. Modern TLC. 2004. V. 17. P. 280-285.

104. Zakrzewski R., Ciesielski W. and Kazmierezak D. Detection of proline, arginine and lysine using iodine-azide reaction in TLC and HPTLC. // J. Separ. Sci. 2003. V.26. P.1063-1066.

105. Kazmierezak D., Ciesielski W., Zakrzewski R. and Zuber M. Application iodine-azide reaction for detection of amino acids in thin layer chromatography. //J. Chromatogr. 2004. V.1059. P.171-174.

106. Rokkens Т. Determination 7 amino acids on silica gel. TLC-plates // J. Clin. Lab. Invest. 1964. V. 16. P. 149-161.

107. Nurmberg E. Investigation 20 amino acids on silica gel "G" // Arch. Pharm. 1959. V. 292. P. 610-617.

108. Mutschiev E., Rochenelmeyer E. Inproved procedure for the separation threonine, serine and phenylalanine by thin-layer chromatography // Arch. Pharm. 1959. V. 292. P. 449-457.

109. Dianastein Т., Ehrahad H., Phys Z. // Chim. 1961. V. 320. P. 131-140.

110. Hogger C.G. Separation of the main protein amino acid by step gradient // Helv. Chim. Acta. 1961. V. 44. P. 173-181.

111. Shellard J., Jolliffe G. H. Thin-layer chromatography 9 amino acids on silica gel // J. Chromatogr. 1968. V. 38. P. 253-265.

112. Малахова И.И. Количественная высокоэффективная тонкослойная хроматография аминокислот. Автореф. дис. канд. хим. наук. СПб., 2003. 22 с.

113. Armstrong D.W., McNeely М. Use of micelles in the TLC separation of polynuclear aromatic compounds and amino acids // Anal. Lett. 1979. - A. 12. -P.1283-1291.

114. Armstrong D.W. Pseudophase Liquid Chromatography: Application to TLC // J. Liquid. Chromatogr. 1980. - V.3, №.6. - P.895-900.

115. Normal- and reversed-phase thin layer chromatography of fluorescein dyes with aqueous micellar solutions as mobile phases / Shtykov S. N., Sumina E. G., Smushkina E. V., Tyurina N. V. // J.Planar Chromatog. 1999. V.12. № 2. P.129-134.

116. Dinamic and static modification of the stationary phases with surfactants in TLC: a comparative study / Shtykov S. N., Sumina E G., Smushkina E V., Tyurina N. V. // J. Planar Chromatog. 2000. V.13, № 3. P.182-186.

117. Сумина Е.Г., Штыков C.H., Тюрина H.B. Поверхностно-активные вещества в тонкослойной хроматографии: обзор // Журн. аналит. химии. 2003. Т.58. № 8. С. 809-819.

118. Cserhati Т., Illes Z. Effect of nature of support and impregnating agent on lipophilicity determination for non ionic surfactants by reversed-phase thin layer chromatography // J. Chromatogr. 1991. V. 31. P. 152-156.

119. Tian D.T., Dan Y. M., Wang H., Wang L.Z., Zie H.Q. Application of microemulsions in thin layer chromatographic analysis of amino acids // Yingyong Huaxue. 2001. V. 18. P. 329-331.

120. Tian D., Shi В., Xie Y. Application of a new developer in thin layer chromatographic analysis of amino acids // Sepu. 2003. V. 21. P. 91-93.

121. Mohammad A. and Hena S. Use of sodium bis (2-ethyl hexyl sulfosuccinate-AOT) anionic surfactant mobile phase systems in thin layer chromatography of amino acids: simultaneous separation of thio amino acids. // Chromatography. 2004. V.25. P. 111-118.

122. Mohammad A., Zehra A. Surfactants modified silica phase for sorption studies of essential amino acids by thin layer chromatography // Coll. And Surfaces A. 2007. V.301.P. 404-411.

123. Mohammad A. and Laeeq S. Mixed surfactants enable separation of lysine from other essential amino acids in TLC on silica gel. // J. Planar Chromatogr. Modern TLC. 2007. V.20. P.423-427.

124. Mohammad A., Rubi G. Mobility behaviour of amino acids on silica static phase: Micelles activated separations // Coll. And Surfaces B. 2008. V.65. P. 166-171.

125. Ленинджер А. Биохимия. Молекулярные основы структуры и функций клетки / Пер. с англ. М.: Мир, 1974. 957 с.

126. Гордон А., Форд Р. Спутник химика. Физико-химические свойства, методики, библиография / Пер. с англ. М.: Мир, 1976. 542 с.

127. Sadek Р.С. The HPLC Solvent Guide, 2-nd ed. New York: John Wiley & Sons. 2002.

128. ГОСТ P ИСО 5725-2-2002, Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений, М. : Изд-во стандартов, 2002.

129. Смагунова А. Н., Карпукова О.М. Методы математической статистики в аналитической химии, Учеб. пособие Иркутск : Изд-во Иркут. гос. ун-та, 2008. - 339 с.